【摘 要】
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骨钙素(osteocalcin,OCN)是由成骨细胞分泌合成的一种非胶原骨基质蛋白,在骨重建、骨矿化等骨代谢过程中发挥重要作用.本研究旨在研究蛋鸡(Gallus gallus domesticus) OCN基
【机 构】
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河北农业大学动物科技学院,保定,071001
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骨钙素(osteocalcin,OCN)是由成骨细胞分泌合成的一种非胶原骨基质蛋白,在骨重建、骨矿化等骨代谢过程中发挥重要作用.本研究旨在研究蛋鸡(Gallus gallus domesticus) OCN基因表达调控机制.选取20只50周龄大午粉蛋鸡,提取血液DNA;以Ensembl基因组数据库中OCN基因序列(ENSGALG00000029494)为模板设计引物,扩增OCN基因启动子;利用Sanger测序方法在OCN基因启动子区寻找潜在的遗传变异.采用JASPAR2018在线软件进行转录因子结合位点预测,并构建启动子不同单倍型荧光素酶报告基因重组载体,转染鸡成纤维细胞系DF-1后检测双荧光素酶活性.结果表明,所扩增蛋鸡OCN基因启动子区具有转录活性,含有维生素D受体(Vitamin D receptor,VDR)、RUNX (Runt related transcription factor)1、RUNX2和RUNX3等骨代谢相关转录因子结合位点,测序结果发现在启动子区存在插入片段CCGCACTCTGCACTTTGCGGCCG和缺失片段CCACA,以及C＞G和A＞G突变,组成4种单倍型;双荧光素酶检测结果表明,启动子区4种单倍型均具有转录活性,但不同单倍型间转录活性存在极显著差异(P＜0.01),其中单倍型Ⅳ活性最高.本研究确定了OCN基因核心启动子区,且不同变异类型启动子的转录活性存在差异,为该基因在蛋鸡骨代谢中的转录调控提供了基础资料.
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