人源性食管鳞癌cDNA文库的构建及鉴定

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目的:构建人源性食管鳞癌cDNA噬菌体表达文库。方法:从人食管鳞癌组织中提取总RNA并分离纯化mRNA,用RTPCR合成cDNA单链,LD-PCR扩增双链cDNA,除去〈500bp的小片段,与载体λTriplEx2噬菌体左右臂连接,经体外包装即构成全长cDNA噬菌体表达文库。转化E.coli XL1-Blue感受态细胞,测定文库的滴度,确定文库的容量大小,用蓝白筛选测定文库的重组率,PCR鉴定cDNA插入片段的大小。结果:构建的人源性食管鳞癌cDNA噬菌体表达文库滴度为1.64×10^4 pfu
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