巴斯德梭菌甘油脱水酶基因的克隆表达、纯化及酶学性质的研究

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用聚合酶链反应(PCR)技术,从巴斯德梭菌(Clostridium pasteurianum)扩增出甘油脱水酶基因(dhaBCE),在大肠杆菌中高效表达,SDS—PAGE(聚丙烯酰胺凝胶)电泳结果显示,分别有相对分子质量为66、21、16kD三条特异性蛋白表达条带。用金属镍亲和层析及S-300H凝胶层析将重组蛋白进行分离纯化,所得纯酶的比活为4·26U/mg。重组酶的最适反应温度42~44℃,最适作用pH=9.10~9.50,它对三个底物结构类似物的米氏常数(Km)值分别是:1,2-丙二醇0.3
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