【摘 要】
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目的:研制一种具有调节宿主免疫系统,同时又能包装核酸进入肿瘤细胞的新型蛋白质载体。方法:利用基因工程技术,将人乙肝病毒核心抗原(HBcAg)的-COOH端和靶向肿瘤的整和素配体
【机 构】
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南京大学医学院临床学院/南京军区南京总医院男科,南京大学医学院临床学院/南京军区南京总医院泌尿外科,重庆佳音前列腺疾病科研所,南京大学医学院临床学院/南京军区南京总医院输血科,北京协和医院泌尿外科,
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目的:研制一种具有调节宿主免疫系统,同时又能包装核酸进入肿瘤细胞的新型蛋白质载体。方法:利用基因工程技术,将人乙肝病毒核心抗原(HBcAg)的-COOH端和靶向肿瘤的整和素配体RGD肽与谷胱甘肽还原酶(GST)在大肠埃希菌中融合表达,经分子筛和GST亲和纯化后,获得DNA包装蛋白GST-RGD-ΔHBcAg。此包装蛋白用FITC标记后与前列腺癌PC-3细胞孵育,观察进入细胞情况;并用此包装蛋白包装含绿色荧光蛋白GFP基因的DNA载体pEGFP-N1,转染PC-3细胞,观察绿色荧光蛋白表达。此外,用包装蛋白GST-RGD-ΔHBcAg免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,检测血清IgG1和IgG2a抗体水平。结果:本研究应用原核表达系统成功地表达并纯化出DNA包装蛋白GST-RGD-ΔHBcAg;荧光显微镜下观察到包装蛋白GST-RGD-ΔHBcAg能进入到PC-3细胞,并能携带绿色荧光蛋白基因进入PC-3细胞并表达;该包装蛋白免疫BALB/c小鼠后,小鼠血清IgG1和IgG2a抗体水平同时升高。结论:本研究研制的DNA包装蛋白GST-RGD-ΔHBcAg可作为基因治疗载体,并能对宿主的免疫系统起调节作用,为肿瘤的免疫——基因治疗载体提供一个新的选择。
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