【摘 要】
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目的 通过腺病毒载体将外源性人端粒酶逆转录酶催化亚基(hTERT)基因导入组织工程常用种子细胞中,探讨其对各细胞生存状况的影响.方法取第4代的猪耳软骨细胞、猪骨髓基质干细胞和人皮肤成纤维细胞,分别以Adeno-hTERT和Adeno-lacZ进行基因转染.5 d后,取各组细胞样品,以逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和PCR-酶联免疫吸附法(PCR-ELISA)分别检测各自的hTERT mRN
【机 构】
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200011,上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科,上海市组织工程重点实验室,200011,上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科,上海市组织工程重点实验室,200011,上海第二医科大学附属第
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目的 通过腺病毒载体将外源性人端粒酶逆转录酶催化亚基(hTERT)基因导入组织工程常用种子细胞中,探讨其对各细胞生存状况的影响.方法取第4代的猪耳软骨细胞、猪骨髓基质干细胞和人皮肤成纤维细胞,分别以Adeno-hTERT和Adeno-lacZ进行基因转染.5 d后,取各组细胞样品,以逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和PCR-酶联免疫吸附法(PCR-ELISA)分别检测各自的hTERT mRNA表达及其hTERT的活性.各组hTERT转染细胞与对照细胞接种于96孔板中,通过MTT法对细胞的生存和活力状况进行检测.结果各组细胞经hTERT转染后,端粒酶的表达和活性均显著上升(P＜0.01).四甲基偶氮唑盐(MTT)氧化反应结果显示hTERT转染的细胞中,细胞存活和活力状况显著高于对照组的细胞(P＜0.01).猪耳软骨细胞经hTERT转染后达到空白对照组细胞的(121.75±5.37)%;猪骨髓基质干细胞达(125.22±2.78)%;人皮肤成纤维细胞达(112.57±3.99)%.结论腺病毒载体介导的外源性hTERT基因在组织工程种子细胞中的表达,可以提高其在体外的扩增潜力,改善组织工程构建中种子细胞来源不足的情况。
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