油菜柠檬酸合酶基因的克隆及在逆境下的表达

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柠檬酸合酶是植物多种代谢途径的限速酶,及代谢变化的标志酶。为了解油菜柠檬酸合酶基因的生理功能,以甘蓝型油菜叶片cDNA为模板,设计特异性引物,获得一编码柠檬酸合酶基因的cDNA序列,全长1 659 bp,ORF区含476个氨基酸残基,序列比对显示其蛋白序列与拟南芥有较高的同源性(96.0%),氨基末端含一线粒体靶信号。聚类分析表明,油菜柠檬酸合酶基因与其他植物内该基因高度同源。对油菜幼苗进行植物生长调节物质、高温和低温、强光照和弱光照、盐、菌核病、干旱和水渍等处理,采用半定量PCR法对油菜叶片柠檬酸合酶基因的表达模式进行检测,发现在盐胁迫、暗光和强光的处理下,柠檬酸合酶基因的表达基本没有变化;在水渍、干旱、IAA和6-BA胁迫下,其表达有所升高,但出现峰值的时间不同,ABA对表达模式的影响与IAA相反;感染菌核病后其表达降低;对GA3的应答呈鞍型。对部分处理采用荧光定量PCR验证,其结果与半定量PCR结果基本一致。
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