【摘 要】
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[目的]探讨高粱HCN途径关键酶CYP71E1基因对玉米幼苗抗螟虫的影响,为培育抗玉米螟新品种奠定基础。[方法]以高粱自交系BTx623幼苗总RNA为模板,反转录成cDNA,利用聚合酶链式反
【机 构】
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锦州医科大学; 辽宁省农业科学院;
【基金项目】
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主要农作物产量性状形成的分子基础(2016YFD0100400);辽宁省企业项目博士后资助(137301)
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[目的]探讨高粱HCN途径关键酶CYP71E1基因对玉米幼苗抗螟虫的影响,为培育抗玉米螟新品种奠定基础。[方法]以高粱自交系BTx623幼苗总RNA为模板,反转录成cDNA,利用聚合酶链式反应(PCR)扩增出1854 bp的CYP71E1基因全长。利用基于位点特异性重组的Gateway技术,通过TOPO克隆将该基因克隆到入门克隆(p CRTM8/GW/TOPO~),在LR克隆酶作用下将入门克隆重组到表达载体(pMDC141)中。[结果]成功构建pMDC141-CYP71E1表达载体并将构建好的表达载体导入农杆菌EHA105,PCR和测序表明所构建的载体及获得的工程菌与预期的完全一致。[结论]Gateway克隆技术与传统的克隆方法相比具有阳性克隆率高、快速、灵活等优点。
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