小鼠γ干扰素(mIFN-γ)基因克隆及其逆转录病毒载体的构建和转基因细胞系的建立

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本研究自小鼠脾脏淋巴细胞中抽提总RNA,应用RT—PCR技术扩增出mIFN-γ基因,按常规方法构建T载体克隆,酶切鉴定,测序分析。结果表明:获得mIFN-γ基因全长为468bp,与GenBank中已发表的mIFN-γ基因核苷酸同源性为100%。通过双酶切将该基因片段插入逆转录病毒载体pGEZ—Term中,脂质体法共转染包装细胞293T,用含有完整病毒颗粒的293T细胞的培养上清感染L929细胞,72h后,加入Zeocin进行筛选,挑选出能稳定表达抗性的细胞株,经RT—PCR检测出转基因L929细胞株中mI
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