【摘 要】
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目的 建立新生SD大鼠神经干细胞(NSCs)的分离培养、体外分化、鉴定及体外长期培养的方法,并探讨血清浓度对NSCs分化的影响.方法 取新生SD大鼠大脑组织,用无血清培养技术培养N
【机 构】
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安徽医科大学第一附属医院骨科,安徽医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室
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目的 建立新生SD大鼠神经干细胞(NSCs)的分离培养、体外分化、鉴定及体外长期培养的方法,并探讨血清浓度对NSCs分化的影响.方法 取新生SD大鼠大脑组织,用无血清培养技术培养NSCs.采用免疫荧光技术对NSCs进行鉴定,检测其巢蛋白(Nestin)表达.用含有不同胎牛血清(FBS)浓度(2％、5％、10％)的DMEM/F-12培养基诱导NSCs分化,分别用神经元特异性微管相关蛋白2(MAP-2)抗体、神经胶质细胞特异性胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体行免疫荧光染色鉴定分化细胞.通过Western blot法检测不同FBS浓度的分化条件下MAP-2与GFAP的表达情况.结果 获得大量未分化且悬浮生长的NSCs球,并能分化为神经元和神经胶质细胞.随着血清浓度的增加,各组MAP-2的表达逐渐增加(P＜0.05),GFAP的表达逐渐减少(P＜0.05).结论 应用无血清培养技术可成功在体外培养出具有增殖、自我更新及多潜能分化能力的新生大鼠NSCs,可于含有不同FBS浓度(2％、5％、10％)的分化条件下进一步分化为神经元及神经胶质细胞,含低浓度血清的条件培养基促进NSCs向神经元方向分化,而高浓度血清则有利于NSCs向神经胶质细胞方向分化.
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