【摘 要】
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目的 制备并鉴定参与结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)细胞壁中肽聚糖合成与成熟的D-丙氨酰-D-丙氨酸连接酶(D-Alanyl-D-Alanine ligase,DdlA)多克隆抗体,并检
【机 构】
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大连医科大学基础医学院,辽宁大连116044
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目的 制备并鉴定参与结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)细胞壁中肽聚糖合成与成熟的D-丙氨酰-D-丙氨酸连接酶(D-Alanyl-D-Alanine ligase,DdlA)多克隆抗体,并检测其效价. 方法 在NCBT数据中检索获取Rv2981c基因(ddlA)序列信息并构建其表达载体pCold Ⅱ-Tb-ddlA,在大肠埃希菌表达体系中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导DdlA蛋白表达,以琼脂糖树脂(Ni-NTA)亲和层析纯化后免疫BALB/c雌鼠,制备抗DdlA多克隆抗体.通过ELISA检测其效价,Western blot分析抗体特异性. 结果 成功获得可溶性表达分子质量约为40 ku的DdlA蛋白,免疫小鼠后制备的抗DdlA多克隆抗体ELISA效价为1∶2 000;Western blot检测该抗体能识别分枝杆菌内源性的DdlA蛋白. 结论 成功制备了抗DdlA蛋白多克隆抗体.该抗体具有特异性且效价高,为研究其在结核分枝杆菌致病中的作用和筛选靶向DdlA抑制剂奠定了基础.
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