【摘 要】
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目的 建立人疱疹病毒8型(HHV-8)感染的间接ELISA检测方法,并初步探讨其应用价值.方法 利用PER技术获得HHV-8 ORb73C基因,插入到原核表达栽体pGEX-6P-1中,在大肠埃希菌B121(DE
【机 构】
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山东省血液中心,济南,250014
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目的 建立人疱疹病毒8型(HHV-8)感染的间接ELISA检测方法,并初步探讨其应用价值.方法 利用PER技术获得HHV-8 ORb73C基因,插入到原核表达栽体pGEX-6P-1中,在大肠埃希菌B121(DE3)中诱导蛋白表达;以纯化的GST-ORF73C融合蛋白为包被抗原.利用方阵滴定法确定包被抗原和抗血清的最适工作浓度,并通过阻断试验、交叉试验、特异性试验、重复性试验及与Chon等建立的K8.1合成多肽.ELISA检测方法进行试验比较等评价其效果.结果 SDS-PAGE及Western-blot检测结果显示,目的 基因在大肠杆菌B121(DE3)中得到高效表达,且表达产物能被KS阳性血清[HIV(+)/KS(+)血清]特异性识别;方阵滴定试验显示:包被抗原的最佳浓度为1.5 μg/mL,血清抗体的最佳稀释度为l:80;阻断试验、交叉试验、特异性试验、重复性试验等表明该方法特异性强、重复性好;对86份HIV(+)/KS(-)血清样品进行检测的结果显示,该方法与Chon等建立的K8.1合成多肽.EHSA检测方法的符合率为98.8%.结论 GST-ORF73C-ELISA检测方法具有良好的特异性和重复性,可用于HHV-8感染的血清学检测及流行病学调查.
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