【摘 要】
：
为探究CRISPR/Cas9基因编辑技术在花生中的应用,利用花粉管注射浸花法和农杆菌介导法转化花生,通过在侵染液中添加合适浓度的AS、MES以及MgCl2·6H2 O促进了转化事件的发生,
【机 构】
：
农业部油料作物生物学与遗传育种重点实验室,湖北 武汉 430062;青岛农业大学 农学院,山东省花生产业协同创新中心,山东 青岛 266109
论文部分内容阅读
为探究CRISPR/Cas9基因编辑技术在花生中的应用,利用花粉管注射浸花法和农杆菌介导法转化花生,通过在侵染液中添加合适浓度的AS、MES以及MgCl2·6H2 O促进了转化事件的发生,并通过注射液每日现用现配最大程度地保持农杆菌的活力,提高了转化效率.本试验首次将该转化法用于基于CRISPR/Cas9技术的花生基因编辑,根据花生FatB基因序列设计编辑靶位点,成功构建CRISPR/Cas9基因编辑载体PX458-Cas9-FatB并成功转化农杆菌菌株GV3101;利用1 mL无菌注射器将当日离心配置的新鲜农杆菌侵染液注射到花生龙骨瓣中至花瓣浸透,每日8:00以前完成注射,连续注射15日,待注射花朵下针后用尼龙绳进行捆绑标记;待荚果成熟后,收获捆绑标记的花生荚果,正常晾晒干燥后剥取花生籽粒,提取籽粒基因组DNA,进行PCR扩增,筛选转化阳性籽粒.结果显示,在被检测的274粒籽粒中,有108粒扩增出了相应目的条带,转基因阳性率为39.42％;经测序验证,108粒阳性籽粒中有1粒在靶位点外发生了基因编辑,在部分阳性籽粒的自交后代中,发现了靶位点发生编辑的籽粒.因此,本研究初步证实利用注射浸花以及农杆菌介导法对基于CRISPR/Cas9技术的花生基因编辑是有效的,但编辑效率有待于进一步提高.
其他文献
对2006-4采自京郊化工区的表层土壤样品,分析了美国环保署规定的16种优控多环芳烃(PAHs).结果表明,土壤(干重)中PAHs的总量范围为42.20～3750.94ng/g,均值为572.62 ng/g;其中7
简要概述了用于DNA检测的荧光探针,并用该类荧光探针与其它分析手段从分子水平上研究环境污染物与生物大分子(蛋白质、核酸)的相互作用,并探讨其作用机理。
本文采用选择性萃取分离结合萃取后再吸附的方法研究了五氯酚在表层沉积物及其各组分上的吸附特性。结果表明,五氯酚在表层沉积物上的吸附可用Langmuir吸附等温线描述,经HO萃
采用电催化氧化(ECO)装置处理海上平台生活污水,研究了不同运行参数下出水水质状况,考察了ECO系统处理海上平台生活污水抗冲击能力及长时间运行稳定性。结果表明,电解反应时
本文以细胞壁作为植物碳氢化合物的代表,研究其对PAHs的吸附作用及在限制分配模型中的应用。结果表明,四种PAHs在细胞壁上的吸附均呈线性,吸附系数(K)随化合物K值的增大而增
应用TG-MS仪研究了未消化和厌氧消化污泥的热解特性。结果显示,300-450℃,未消化污泥热解失重明显大于消化污泥;700℃以上的高温段,未消化污泥发生硫酸盐的分解,消化污泥则有
通过批次吸附实验与光谱表征,研究了土霉素与铜离子在矿物与土壤表面的吸附以及相互作用。结果表明,在酸性条件下,土霉素与铜离子通过配位作用,互为桥键,从而促进各自在矿物
为了丰富小麦功能分子标记的数量,为小麦功能基因的定位、比较基因组学、小麦起源和进化等方面的研究奠定基础.从前期利用小麦转录组数据鉴定出的8389个EST-SSR序列中,随机选
四溴双酚A(tetrabromobisphenol A,TBBPA)是世界上生产量最大的溴代阻燃剂之一,广泛应用于塑料、橡胶、纺织、纤维、造纸等工业,在生产、使用过程中对环境造成了一定污染.已
我们新疆是一个多民族的地区。我是乌孜别克族,在塔城专区区医院外科工作,曾经参加过新疆维吾尔自治区西医离职学习中医班(第一期)的学习。西医学习中医,实现中西医结合,是