【摘 要】
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目的 探讨 β-N-乙酰氨基葡萄糖(β-N-acetylglucosamine,GlcNAc)对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)通路的影响.方
【机 构】
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400042 重庆,陆军军医大学(第三军医大学)第三附属医院(野战外科研究所)泌尿外科;
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目的 探讨 β-N-乙酰氨基葡萄糖(β-N-acetylglucosamine,GlcNAc)对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)通路的影响.方法 分离健康成年大鼠阴茎组织,高糖培养基诱导阴茎海绵体平滑肌细胞(caveous smooth muscle cells,CSMC)分离生长,免疫荧光、免疫组化鉴定CSMC,GlcNAc处理CSMC 12 h,分别于0、10 min、1、2、4、8、12 h收集细胞裂解液,O-(连接)N-乙酰葡糖胺转移酶(O-N-acetylglucosamine transferase,OGT)抑制剂Alloxan、O-(连接)N-乙酰葡糖胺水解酶(O-GlcNAcase,OGA)抑制剂Thiamet G及GlcNAc处理CSMC 72 h,Weste blot检测蛋白总糖基化水平及MAPKs通路相关蛋白在12、72 h的磷酸化水平.结果 成功分离培养大鼠CSMC,GlcNAc显著提升了CSMC细胞O-糖基化水平(P<0.05).处理细胞后12 h,GlcNAc显著抑制大鼠CSMC的ERK1/2、JNK1/2/3和p38的蛋白磷酸化水平(P<0.05),处理细胞后72 h,GlcNAc显著抑制了大鼠CSMC的ERK1/2和p38蛋白磷酸化水平(P0.05),且与Thiamet G的作用相同.另外,GlcNAc与Thiamet G能协同抑制ERK1/2、JNK1/2/3和p38的蛋白磷酸化水平(P<0.05).结论 GlcNAc经O-糖基化依赖性途径抑制阴茎海绵体平滑肌细胞中MAPKs通路.
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