目的 探讨牙龈蛋白酶在诱导成骨细胞凋亡过程中对整合素α5、β1的调节机制,为牙周炎发病机制的研究提供理论依据.方法 标准厌氧环境下培养牙龈卟啉单胞菌W83,分离提纯牙龈蛋白酶.用8.348 U/L牙龈蛋白酶处理小鼠成骨细胞MC3T3-E1 48 h,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法-4’,6-二脒基-2-苯基吲哚[transferase-mediated deoxyuridine triphosphate-biotinnick end labeling-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine dihydrochloride,TUNEL-DAPI]双染色法检测细胞凋亡；蛋白质印迹法检测整合素α5、β1蛋白的表达水平.结果 精氨酸-蛋白酶活性为(41.74±2.11) U/L,赖氨酸-蛋白酶活性为(1.02±0.25)U/L.TUNEL-DAPI染色显示牙龈蛋白酶作用于MC3T3-E1细胞48 h后诱导细胞发生凋亡.在短时间内(≤72 h)牙龈蛋白酶呈时间依赖性下调整合素α5、β1的表达水平,48 h时整合素α5、β1相对表达量分别为(0.485±0.039)、(0.504±0.002),72 h时分别为(0.398±0.058)、(0.179±0.001),与对照组(蛋白相对表达量分别为1.000±0.000、1.000±0.000)相比差异均有统计学意义(P ＜0.05)；72 h后,整合素α5表达水平与对照组相比差异无统计学意义,但整合素β1仍持续下调(96、120 h时相对表达量分别为0.604±0.003、0.357±0.002),均显著低于对照组(1.000±0.000) (P＜0.05).牙龈蛋白酶特异性抑制剂甲苯磺酰-L-赖氨酰-氯甲基酮(tosyl-CL-clysine-chloromethyl-ketone,TLCK)可有效抑制蛋白酶活性,使整合素α5、β1蛋白表达量分别从(0.398±0.058)、(0.179±0.001)显著上升至(0.781±0.012)、(0.857±0.060)(P＜0.05),但TLCK本身不改变整合素α5、β1的表达水平(P＞0.05).同时牙龈蛋白酶还呈剂量依赖性下调整合素α5、β1的表达水平,20.8700 U/L牙龈蛋白酶作用下整合素α5、β1相对表达量达最低值(0.105±0.004、0.020±0.000),与对照组(1.000±0.000)相比差异有统计学意义(P＜0.05).牙龈蛋白酶直接处理成骨细胞膜蛋白提取物,与对照组相比各组间整合素α5、β1相对表达量差异无统计学意义(P＞0.05),提示牙龈蛋白酶不直接降解整合素α5、β1.结论 牙龈蛋白酶在诱导成骨细胞凋亡过程中呈时间和剂量依赖下调整合素α5、β1的表达,下调途径不是通过该蛋白酶的直接蛋白水解发挥作用。