农杆菌介导酸枣叶片遗传转化SPDS基因体系的建立

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为研究根癌农杆菌介导的SPDS基因遗传转化酸枣叶片体系建立的条件,本研究以酸枣叶片为受体,采用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,LBA4404)介导法,将SPDS基因导入酸枣基因组,并对其遗传转化体系进行优化,对筛选获得的转基因酸枣植株进行检测.结果表明,根癌农杆菌介导的SPDS基因遗传转化的最佳条件为:将预培养3d的酸枣叶片,用LBA4404菌株菌液(OD600=0.6)浸染15 min,共培养3d,然后转入含Kan 20 mg/L和Cef200 mg/L的筛选分化培养基上诱导分化,待抗性芽长到2~3 cm后,转入含Kan 40 mg/L和Cef 100 mg/L的筛选生根培养基上进行筛选,在以上最佳遗传转化条件下,经过3次筛选得到19个抗性植株,经PCR检测,有9株呈阳性,即SPDS基因己被整合到酸枣基因组中,并可以正常转录.本研究成功建立了根癌农杆菌介导的酸枣叶片高效遗传转化体系,为枣树基因工程育种和种质创新提供了帮助.
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