冠心病痰证患者TGF-β1-PI3K-GAG通路研究

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目的:以糖胺聚糖(GAG)为切入点探求冠心病患者痰证相对于阴虚证所存在的差异及其可能机制.方法:收集广东省中医院心血管一科冠心病患者52例,分别提取冠心病痰证及阴虚证患者血清GAG,及患者血清作用小鼠血管平滑肌细胞后的GAG.硫酸咔唑法进行GAG含量测定,凝集素检测法测定GAG种类,Western Blot法测定多能蛋白聚糖Versican,ELISA法测定患者血清中的转化生长因子-β1(TGF-β1)含量和多功能蛋白聚糖Versican含量;TGF-β1依赖Smad通路抑制剂SB525334和PI3K通路抑制剂MK2206干预后,再测定GAG含量,观察痰证与阴虚证GAG检测值差异对应的信号通路.结果:冠心病患者痰证相比于阴虚证,血清中GAG差异无统计学意义.相近血糖水平的痰证患者血清作用于平滑肌细胞后,较阴虚证患者作用后,GAG增高(P<0.05),进一步分析发现增高的GAG主要是硫酸软骨素/硫酸皮肤素(CS/DS),硫酸软骨素类蛋白聚糖(CSPG)中Versican表达升高(P<0.05);与阴虚证比较,痰证患者血清中Versican含量差异无统计学意义,TGF-β1含量增高(P<0.01);添加TGF-β1后,平滑肌细胞GAG含量升高;与阴虚证血清相比,添加痰证血清明显升高平滑肌细胞的GAG含量;在抑制Smad通路后,痰证组GAG比阴虚证组GAG增高的效应仍存在,而在抑制PI3K通路后,痰证组GAG比阴虚证组GAG增高的效应消除了.结论:冠心病痰证患者TGF-β1-PI3K-GAG通路,可能是痰病变的特征信息,其中TGF-β1与生痰因子相关,而GAG和Versican作为痰的可能物质基础,因其主要在组织间隙,在血清中反应不够灵敏.
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