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目的：研究Zonadhesin蛋白D4 domain在受精过程中的作用。方法：将小鼠Zonadhesin D4结构域分亚结构域（VWD subdomain及余G-端片段）克隆，在E．coli诱导表达目的蛋白，将纯化重组蛋白片段为抗原，制备兔抗鼠D4结构域多克隆抗体，免疫印迹法、精子间接免疫荧光染色鉴定多克隆抗体的特异性及D4结构域在小鼠精子表达。用多抗处理获能小鼠精子，然后与小鼠超排卵子进行体外受精及精子-透明带结合实验。结果：D4亚结构域成功克隆表达，制备了能特异性识别精子天然Zonadhesin D4