脂肪组织来源干细胞定向分化脂肪组织的体内外实验研究

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目的 分离和培养脂肪组织来源干细胞(ASCs),鉴定其是否具有干细胞表面标志,研究携带GFP基因的ASCs向脂肪组织的体外定向诱导分化能力,同时判断种子细胞ASCs与Ⅰ型胶原支架混合培养后在体内构建组织工程化脂肪组织的可能性.方法 取GFP小鼠腹股沟部脂肪组织,使用酶消化法进行原代培养,流式细胞仪鉴定其表面干细胞标志,细胞传至第3代后使用脂肪分化培养基诱导2周,观察细胞形态及功能变化.将诱导分化后的细胞与支架材料混合培养后12 h,将支架材料移植到裸鼠背部皮下,观察新生组织情况,并对新生组织使用HE及油红O染色进行鉴定.结果 原代培养的ASC形态类似于成纤维细胞,具有很强的增殖能力,能持续稳定表达表面干细胞标志.在脂肪分化培养基的作用下,胞浆内脂滴不断聚集,逐渐演变为成熟的脂肪细胞,油红O染色阳性.体内实验中在裸鼠皮下发现了0.5 ml的新生组织块,常规病理及油红O染色均证实其为成熟脂肪组织块.结论 脂肪组织来源的干细胞ASC能在体外定向诱导分化为成熟脂肪细胞,且ASC能作用种子细胞与Ⅰ型胶原支架在体内成功构建脂肪组织.
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