缺氧对培养的人视网膜色素上皮细胞中血管生成素-2表达的影响

来源 :中华实验眼科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wang1hnsc
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背景 脉络膜新生血管(CNV)是导致一些眼底疾病视力丧失的主要原因,而血管生成素2(Ang-2)与血管生成的关系较为密切.目前在缺氧条件下人视网膜色素上皮(RPE)细胞上Ang-2的表达情况与CNV发病的关系研究较少. 目的 观察缺氧对体外培养的人RPE细胞中Ang-2表达的影响,探讨Ang-2在CNV形成中的可能作用. 方法 人RPE细胞经培养和传代,取第4~7代细胞以5×107个/L密度接种于培养皿,常氧对照组不加CoCl2,缺氧组换以含终浓度为200 μmol/L CoCl2的培养基5 ml建立 RPE细胞化学缺氧模型,分别于加药导致缺氧后0.5、1、2、4、6、12和24 h终止缺氧.采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测缺氧不同时间对体外培养的人RPE细胞Ang-2 mRNA表达的影响;采用酶联免疫吸附反应(ELISA)法检测缺氧不同时间对体外培养的人RPE细胞上清液中Ang-2蛋白质量浓度的影响. 结果 人RPE细胞复苏后存活率达90%,第4代传代细胞中色素很少,细胞形态多为梭形.不同培养条件组人RPE细胞中Ang-2 mRNA/β-actin mRNA值的总体比较差异有统计学意义(F=1086.30,P=0.00);缺氧条件下培养0.5h后人RPE细胞中Ang-2 mRNA/β-actin mRNA值开始明显增加,至缺氧培养后4~6 h达高峰,与常氧对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);缺氧培养24 h后Ang-2 mRNA/β-actin mRNA值接近常氧对照组.ELISA分析结果表明,不同培养条件下人RPE细胞培养基上清液中Ang-2蛋白的总体比较差异有统计学意义(F=1034.00,P=0.00),缺氧条件下培养0.5 h后人RPE细胞中Ang-2蛋白的质量浓度开始明显升高,6h达到高峰,与常氧对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);缺氧培养24 h后Ang-2蛋白的质量浓度接近常氧对照组.结论 缺氧可显著上调体外培养 的人RPE细胞中 Ang-2的表达,Ang-2于缺氧早期呈高表达,提示Ang-2参与了CNV的形成,可能在CNV形成过程的早期阶段发挥作用。

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