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目的
通过检测剔除心脏神经嵴的异常鸡胚心脏组织与正常心脏组织之间在发育过程中存在差异表达的基因,探索心脏圆锥动脉干缺损(CTD)发生的相关基因。
方法用电极刺激方法在鸡胚发育早期破坏心脏神经嵴,建立圆锥动脉干缺损模型。应用抑制消减杂交法(SSH)筛选出在正常心脏组织表达,但在异常心脏组织中表达减少或不表达的基因,构建减数杂交文库,用cDNA芯片技术验证,并进行测序。
结果建立了含261个克隆的cDNA减数文库,经验证有83个克隆在实验组与对照组之间存在明显的表达差异(31.8%)。随机选15个克隆测序,最后确定7种基因。经Genebank查询发现有一cDNA片段与鸡(Gallus)DEAD-box解旋酶mRNA基因序列100%同源。
结论在剔除心脏神经嵴造成圆锥动脉干缺损畸形的过程中,有多个基因参与和调节。DEAD-box RNA解旋酶基因的缺失可能是造成心脏CTD畸形的原因之一。