【摘 要】
：
根据GenBank上查到的人胶原蛋白序列COL6A2(NM058175.2),利用Primer 5设计特异性引物,以吉林农业大学生物物理实验室构建的重组质粒pCMV-Sport6-COL6A2为模板进行目的基因的
【基金项目】
：
吉林省自然科学基金项目(201115189)
论文部分内容阅读
根据GenBank上查到的人胶原蛋白序列COL6A2(NM058175.2),利用Primer 5设计特异性引物,以吉林农业大学生物物理实验室构建的重组质粒pCMV-Sport6-COL6A2为模板进行目的基因的克隆,获得目的基因COL6A2,然后用双酶切的方法连接目的基因COL6A2和表达载体pET32a,将连接产物转化到大肠杆菌中构建原核表达载体pET32a-COL6A2。再将鉴定成功的重组质粒pET32a-COL6A2分别转化到大肠杆菌BL21、BL21(DE3)、BL21(BE3)plysS及Rosetta(DE3)中,采用1 mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达,经12%SDS-PAGE电泳分析并筛选出重组蛋白表达量最高的菌株。利用Ni Sepharose 6 FastFlow琼脂糖树脂亲和层析柱纯化重组蛋白。结果表明:获得了大小为570 bp的COL6A2片段,经测序鉴定序列正确;成功构建了pET32a-COL6A2原核表达载体并表达出约30 kD的目的蛋白;筛选出BL21(DE3)作为高效表达菌株,其重组蛋白表达量占菌体总蛋白的23.9%;经镍离子亲和层析纯化获得了纯度>90%的目的蛋白。
其他文献
本文通过实际案例介绍了桩基础承台降低标高的施工方法，为类似的工程项目提供参考。
目的了解失能老年人主要照顾者的虐待倾向并分析其原因，为防止老年虐待的发生提供科学依据。方法采用方便抽样的方法，运用一般情况调查表、日常生活活动能力量表（ADLs）和照顾者虐待老年人评估量表（CASE）对广州地区300例失能老年人主要照顾者进行问卷调查。结果失能老年人的失能程度以中重度为主，失能老年人照顾者虐待倾向总得分的平均分为（3.3 ± 2.3）分。有178位（59.4%，178/300）的失
笔者分析了大数据背景下智慧校园建设策略,从智慧人才培养、智慧科研、智慧校园服务、智慧决策管理、学生就业分析及推荐、掌上移动教学与智慧办公等方面分析了智慧校园应用
一、作品背景歌剧《唐·璜》创作于1787年,这是莫扎特歌剧中少有的具有相当思想深度和人性探究意义的杰作,着重于人物的心理刻画,优美抒情的旋律,洋溢着古典美和青春的生
通过数值模拟计算、理论分析,探讨了高陡边坡状况下较为复杂的桥梁桩基受力特殊性,针对边坡防护提出了几点合理措施,有助于加大桩基的承载力度,可进一步保障桥梁桩基及其结构
对国内外常用的桥梁船撞力简化计算公式进行了讨论和分析,剖析了国内现有的规范公式所存在的问题。通过大量的船舶撞击刚性墙的数值模拟,研究船舶速度、吨位、接触面积对船撞
应用APAAP法对15例肺癌TIL部分膜抗原的表达动态进行了免疫组化分析。结果显示:未经激活的TIL细胞,其膜抗原(CD~+3,CD~+4,CD~+8)的表达动态基本恒定,经IL-2激活的TIL细胞体外
通常情况下,市场进入壁垒接近经济现实,便于观察理解和调查分析,市场壁垒越高,企业市场力量越大。因此,通过分析市场进入壁垒可以形成对市场力量相对准确的初步判断,这不仅是
党的十七大报告提出“统筹抓好以高层次人才和高技能人才为重点的各类人才队伍建设”的明确要求。博士后人才队伍是国家高层次人才队伍的“蓄水池”，是我国人事人才工作的重点
目的:探讨甲硝唑联合乳酸杆菌治疗妊娠期滴虫性阴道炎患者的临床疗效。方法:将本院妇科门诊收治的88例妊娠期滴虫性阴道炎患者分为联合组和对照组各44例,两组患者均给予甲硝