【摘 要】
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目的 筛选、鉴定登革病毒(Dengue virus,DENV)2型(DV2)型特异性抗原片段;建立优化检测DV2抗体的ELISA方法,并进行临床应用验证.方法 采用生物信息学方法分析1～4型(DV1～DV4)及其
【机 构】
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黑龙江八一农垦大学,黑龙江大庆163319广州军区疾病预防控制中心,广东广州510507;广州军区疾病预防控制中心,广东广州,510507;黑龙江八一农垦大学,黑龙江大庆,163319;
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目的 筛选、鉴定登革病毒(Dengue virus,DENV)2型(DV2)型特异性抗原片段;建立优化检测DV2抗体的ELISA方法,并进行临床应用验证.方法 采用生物信息学方法分析1～4型(DV1～DV4)及其相近虫媒病毒基因组序列,选择预测得分较高且在不同DV2流行株中高度保守的表位;利用pMal-c2x表达系统制备其原核表达抗原,Western blot法分析其免疫原性;建立优化检测DV2抗体的ELISA方法,并验证方法的特异性及灵敏性;应用优化的方法检测33份各型登革热(Dengue fever,DF)确诊患者及30份健康体检人群血清样本.结果 经生物信息学分析,预测获得DV2特异性抗原表位12段,预测得分值较高的8段(E123～128、E131 ～ 135、E143～149、E223～229、E286 ～ 294、E340～ 347、E383～387及E391 ～ 398)重组表达载体经双向测序证实读码框架准确,经Western blot分析,包含抗原位点E143～149区域的融合表达片段D2Ag3仅与DV2多克隆抗体发生免疫反应.ELISA优化条件为抗原包被浓度2 μg/mL,4 ℃包被24 h,37℃封闭2h;经该方法分析,D2Ag3原核表达抗原与DV2多克隆抗体反应的A450≥1.37,与其他20种多克隆抗体反应的A450均≤0.04,DV2多克隆抗体在40～20 480倍稀释范围内,均可获得阳性检测结果.63份临床阳性样本A450＞0.32,阴性样本A450＜0.12,检测样本/阴性对照比值(sample/negative,S/N)＞2.1.结论 成功筛选鉴定了DV2型特异性抗原片段,初步建立了DV2 IgG抗体的ELISA检测方法,该方法具有良好的特异性及灵敏性,为DF的鉴别诊断提供了技术手段.
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