【摘 要】
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通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增了H5N1亚型鹅源禽流感病毒(AIV)完整的血凝素(HA)基因并进行了克隆与鉴定.序列测定结果已经登陆GenBank,登陆号为AY639405.序列分析表
【机 构】
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南京农业大学,农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,南京,210095College of Medicine, University of Illinois at Chicago,Chicago,I
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通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增了H5N1亚型鹅源禽流感病毒(AIV)完整的血凝素(HA)基因并进行了克隆与鉴定.序列测定结果已经登陆GenBank,登陆号为AY639405.序列分析表明所扩增的HA基因开放性阅读框架(ORF)由1707个核苷酸组成,共编码568个氨基酸,裂解位点的氨基酸组成为RKKR↓GLF,含连续的碱性氨基酸,具有高致病性AIVHA基因裂解位点的特征.构建了含HA基因的真核表达载体pcDNA-HA,通过与鼠白血病病毒(MuLV)假病毒构建体系的两种质粒pHIT60和pHIT111共转染人胚肾细胞293T,48h后收集假病毒上清,超离后通过Western-blot证明HA蛋白能够在假病毒颗粒表面表达,表明HA能够整合到此病毒粒子表面.通过感染293T、COS-7和NIH3T3三种不同的靶细胞,证实所构建的假病毒粒子具有感染性和泛嗜性.本研究成功构建了具有感染性的MuLV-HA假病毒体系,为研究鹅源禽流感病毒侵入细胞的机理及其组织嗜性的变异提供一种新方法.
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