论文部分内容阅读
为检测H7N9禽流感病毒(AIV) DNA疫苗的免疫保护效力,本研究将H7N9禽流感疫苗株A/Chicken/Guangxi/SD098/2017 (H7N9) [CK/GX/SD098/17 (H7N9)]的HA基因密码子优化后,定向克隆至载体pCAGGS中构建重组质粒pCA-SD098.将pCA-SD098转染至293T细胞后,采用间接免疫荧光(IFA)和western blot 检测,结果显示,HA蛋白可以在293T细胞中正确表达.分别利用15 μg和20μg重组质粒pCA-SD098免疫3周龄SPF鸡,3周后以相同的剂量和方式加强免疫,加强免疫一周后通过鼻腔分别感染105 EID50的同源高致病性AIV (HPAIV)CK/GX/SD098/17 (H7N9)和异源低致病性AIV (LPAIV) A/Chicken/Chongqing/SD057/2017 (H7N9)[CK/CQ/SD057/17 (H7N9)],攻毒10d内记录免疫鸡发病和死亡情况,检测免疫鸡HI抗体水平,并于攻毒后第3d、第5d和第7d无菌采集所有鸡的喉头和泄殖腔拭子,采用红细胞凝集试验(HA)检测病毒的滴度.结果 显示,重组质粒pCA-SD098免疫后可以诱导SPF鸡产生较高水平的HI抗体,15 μg pCA-SD098剂量免疫鸡后能够完全抵御H7N9 HPAIV的致死性攻击,20 μg pCA-SD098剂量可以有效阻断H7N9 LPAIV的感染.攻毒后,所有免疫鸡无发病、无死亡、无排毒,本研究为质粒pCA-SD098作为防控H7N9禽流感的候选DNA疫苗提供了实验依据.