苜蓿萎蔫病菌TaqMan探针实时荧光PCR检测方法的建立

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苜蓿萎蔫病菌是我国对外检疫性二类有害生物,目前国内尚无发生.在出入境检验检疫中主要是采用生物学和血清学方法进行检测,劳动强度大,耗费时间长.根据苜蓿萎蔫病菌与其它细菌菌株16S rDNA 序列差异,设计出对苜蓿萎蔫病菌具有稳定点突变特异性探针,利用该探针对棒形杆菌属4个种及其它属细菌进行了实时荧光PCR检测实验.结果表明,只有苜蓿萎蔫病菌能检测到荧光信号,其它细菌没有荧光产生.该方法特异性强,灵敏度高,能检测到21.4fg质粒DNA,比常规PCR灵敏100倍,而且整个过程只需要2~3h.该方法可有效地应用
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