【摘 要】
：
[目的] 研究了植物病毒表达载体pClYVV/CP/W的构建及用pClYVV/CP/W表达绿色荧光蛋白(GFP),为植物反应器生产有用蛋白、开发有效的植物病毒载体提供参考.[方法] 用三叶草黄脉
【机 构】
：
沈阳农业大学生物科学技术学院,辽宁省沈阳市农业检测中心,深圳市九升生物制品有限公司
论文部分内容阅读
[目的] 研究了植物病毒表达载体pClYVV/CP/W的构建及用pClYVV/CP/W表达绿色荧光蛋白(GFP),为植物反应器生产有用蛋白、开发有效的植物病毒载体提供参考.[方法] 用三叶草黄脉病毒侵染性全长cDNA 克隆pClYVV基因组的Nib/CP基因之间的一段多克隆位点和两侧含有病毒蛋白酶Nia切割识别序列的多聚脱氧核糖核苷酸接头,构建pClYVV/CP/W载体,并将绿色荧光蛋白基因插入pClYVV/CP/W中构建pClYVV/CP/W/GFP载体,用反转录PCR对重组病毒克隆转录情况进行检测,并用Western杂交对重组病毒克隆表达的目的基因产物进行测定.[结果] pClYVV/CP/W/GFP接种的蚕豆幼苗表现出与野生型ClYVV相同的症状,发病率达100%,表明重组病毒克隆pClYVV/CP/W/GFP有侵染性,外源基因的插入没有破坏载体pClYVV/CP/W的开放阅读框；以感染叶总RNA为模板,对pClYVV/CP/W/GFP表达GFP外源基因的稳定性进行了检测,从F0 (重组病毒质粒最初转录出的病毒)一直检测到F4子代病毒.检测结果表明,外源基因在F4子代病毒基因组中稳定存在；以从感染叶中提取的总蛋白为抗原,以GFP抗体为第1抗体,以碱性磷酸酶标记抗体为第2抗体,用Western杂交对重组病毒克隆pCVYVV/CP/W/GFP表达外源蛋白进行了定性检测.从F0一直检测到F4子代病毒.检测结果表明,重组病毒克隆pClYVV/CP/W/GFP至少到F4子代病毒能稳定表达GFP.[结论] 该研究结果为用植物表达有用蛋白提供了有用的植物病毒载体.
其他文献
通过TMR日粮加工调制试验,研究粗饲料加工长度这一主要指标对THR日粮品质和性能的影响规律,确定了适合吉林西部主要饲料原料特点的加工长度控制参数,建立了TMR日粮加工调制技
生物质能是一种重要的可再生能源,利用生物质气化技术能实现CO2的减排,节约常规能源,符合可持续发展的要求.文章介绍了自1664年Thomas shirly进行气化试验以来,历经几百年的
为探讨螯合剂对植物吸收重金属的影响,采用盆栽试验,研究了螯合剂乙二胺四乙酸(EDTA)和柠檬酸(CA)对土壤重金属Cd的有效态以及叶用红菾菜(Beta vulgaris var.cicla L)富集Cd
在单因子试验的基础上,采用了L9 (34 )正交试验设计探讨了培养基配比、植物生长调节剂的不同浓度、蔗糖量等因素对诱导盐桦(Betula halophila)丛生芽生根的影响.结果表明,对
土壤微生物对大气对流层臭氧浓度升高的响应是全面评价臭氧浓度变化对陆地生态系统影响的关键.本文简要回顾了大气臭氧浓度升高对生态系统的影响概况,介绍了土壤微生物对人工
路面γ辐射监测仪是一种用于对核设施和核电厂内路面和周围环境的放射性污染进行监测的车载放射性监测设备,可以实现对核设施和核电站厂区各处的放射性污染的及时快速监测。
目的 探讨MCC、Survivin、P73和RhoA在大肠癌中的表达及临床意义.方法 应用实时荧光定量PCR的方法检测38例Dukes A期患者的大肠癌组织、癌旁组织和20例健康人群结肠组织的MCC
为明确食物中重金属离子在昆虫体内的分布和转移情况,本文采用等离子体原子发射光谱仪检测了植食性昆虫斜纹夜蛾Spodoptera litura Fabricius连续3个世代6龄幼虫对食物中过量
详细介绍了BLU-800的结构特点和功能特点,并在此基础上,比较了BLU-300、BLU-160、BLU-120与其的差异.
目的:构建一个具有拮抗肌动蛋白装配功能的重组质粒EGFP-N2/CA.为观察该基因片段对于肿瘤细胞的侵袭转移能力的影响.方法:通过PCR扩增获得目的片段N-WASP-CA,通过双酶切和连