研究脂多糖(LPS)对大鼠胰岛素瘤细胞INS–1自噬和凋亡的影响及其可能机制。
方法取处于对数期生长的INS–1细胞用于实验，分别用0.1、1.0、10.0 mg/L LPS处理细胞，24 h后用磺酰罗丹明B(SRB)染色法检测LPS对INS–1细胞增殖的影响，用二氯荧光素双醋酸盐(DCFH–DA)作为荧光探针检测细胞内活性氧的水平变化，应用Western blotting法检测细胞自噬体膜上自噬标志分子微管相关蛋白1的轻链3–Ⅱ(Map1LC3–Ⅱ)和凋亡标志蛋白聚腺苷二磷酸–核糖多聚酶(PARP)切割带的变化。将INS–1细胞的自噬必需基因7(Atg7)通过siRNA介导的RNA干扰手段进行沉默，然后以1.0 mg/L LPS处理细胞，24 h后应用Western blotting检测细胞中Atg7、Map1LC3–Ⅱ和PARP切割带的水平。先用400 μmol/L的活性氧清除剂N–乙酰半胱氨酸(NAC)处理INS–1细胞，1 h后加入10.0 mg/L的LPS，24 h后应用Western blotting法检测细胞Map1LC3–Ⅱ蛋白和PARP切割蛋白的水平。组间数据比较采用方差分析和t检验。
结果与对照组(0.755±0.030)比较，0.1、1.0、10.0 mg/L LPS组INS–1存活率降低，差异有统计学意义(分别为0.658±0.042、0.658±0.015、0.634±0.029, F＝30.98，P<0.01)；与对照组(0.447±0.012)相比，0.1、1.0、10.0 mg/L LPS组Map1LC3–Ⅱ蛋白水平增加，差异有统计学意义(分别为0.992±0.030、0.949±0.020、0.982±0.013，F＝525.79，P<0.01)；与对照组(0.055±0.001)相比，0.1、1.0、10.0 mg/L LPS组PARP切割蛋白水平增加，差异有统计学意义(分别为0.313±0.007、0.390±0.011、0.500±0.033，F＝327.09，均P<0.01)；与对照组比较，10 mg/L LPS组活性氧产生明显增多。与对照组比较，转染Atg7 siRNA组Atg7、Map1LC3–Ⅱ和PARP切割蛋白水平均显著下降，差异均有统计学意义(t＝156.069、123.154、103.246，均P<0.01)。与LPS 10.0 mg/L组比较，LPS 10.0 mg/L ＋NAC组Map1LC3–Ⅱ和PARP切割蛋白水平均显著下降，差异均有统计学意义(t＝66.37、26.84，均P<0.01)。
结论LPS可诱导INS–1细胞的自噬和凋亡，且其所诱导的凋亡依赖于自噬的发生；活性氧参与了LPS诱导的INS–1细胞的自噬和凋亡。