探讨下调微小RNA(miRNA)-99b表达对脑胶质瘤细胞侵袭的影响及其作用机制。
方法体外常规培养脑胶质瘤U251细胞。(1)将U251细胞分为空白对照组、无义序列对照组和miRNA-99b抑制物组，后2组分别转染无义序列和miRNA-99b抑制物，空白对照组不做任何处理。采用RT-PCR检测U251细胞中miRNA-99b、哺乳动物雷帕霉素靶分子(mTOR)mRNA的表达，采用Western blotting检测U251细胞中mTOR、真核翻译起始因子4E结合蛋白1(4E-BP1)及磷酸化(p)-4E-BP1蛋白的表达，采用Transwell侵袭实验检测U251细胞的侵袭能力。(2)将U251细胞分为无义序列对照组、mTOR siRNA组，分别转染无义序列和mTOR siRNA。采用RT-PCR检测U251细胞中miRNA-99b、mTOR mRNA的表达，采用Western blotting检测U251细胞中mTOR、p-4E-BP1蛋白的表达。(3)将U251细胞分为miRNA-99b抑制物+无义序列对照组、miRNA-99b抑制物+mTOR siRNA组，分别转染miRNA-99b抑制物+无义序列、miRNA-99b抑制物+mTOR siRNA。采用Western blotting检测U251细胞中p-4E-BP1蛋白的表达，采用Transwell侵袭实验检测U251细胞的侵袭能力。
结果(1)与空白对照组、无义序列对照组比较，miRNA-99b抑制物组U251细胞中miRNA-99b mRNA表达明显降低，mTOR mRNA及蛋白表达明显升高，p-4E-BP1蛋白表达明显升高，穿膜细胞数明显增多，差异均有统计学意义(P<0.05)，而4E-BP1蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。(2)与无义序列对照组比较，mTOR siRNA组U251细胞中mTOR mRNA及蛋白表达明显降低，p-4E-BP1蛋白表达明显降低，差异均有统计学意义(P<0.05)，而miRNA-99b mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。(3)与miRNA-99b抑制物+无义序列对照组比较，miRNA-99b抑制物+mTOR siRNA组U251细胞中p-4E-BP1蛋白表达明显降低，穿膜细胞数明显减少，差异均有统计学意义(P<0.05)。
结论下调miRNA-99b表达可促进脑胶质瘤细胞侵袭，其作用机制与mTOR/4E-BP1信号通路调控有关。