【摘 要】
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[目的]采用EDC(碳化二亚胺)交联结合化学萃取法制备脱细胞脊髓支架,探讨脱细胞脊髓支架制备效率,分析支架的生物学特性,观察支架能否保留细胞外基质黏多糖成分.[方法]采用EDC
【机 构】
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第三军医大学第二附属医院骨科,重庆市,400037
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[目的]采用EDC(碳化二亚胺)交联结合化学萃取法制备脱细胞脊髓支架,探讨脱细胞脊髓支架制备效率,分析支架的生物学特性,观察支架能否保留细胞外基质黏多糖成分.[方法]采用EDC交联结合化学萃取法(液氮结合42℃恒温水浴反复冻融6次+1％ Triton X-100± 1％脱氧胆酸钠±EDC交联±液氮结合42℃恒温水浴反复冻融6次± 1％ TritonX-100± 1％脱氧胆酸钠)处理正常脊髓20根,得到脱细胞脊髓支架(支架组);对照于正常大鼠脊髓组织(对照组).通过HE染色检验支架组脱细胞效果,统计脱细胞脊髓支架的等级评分“优”、“良”、“一般”、“差”的百分比;选取HE染色脱细胞彻底、评分为“优”的脊髓支架,DAPI染色验证其内部细胞残留情况的等级评分是否一致为“优”;通过电镜扫描观察两组内部三维结构并分析其孔径;分析脊髓组织脱细胞处理前后的含水率、孔隙率、抗酶解性的变化;通过免疫组化的方法,观察两组材料细胞外基质中黏多糖分布情况.[结果]支架组通过HE染色观察到脱细胞彻底、评分为“优”的百分比为80％;HE染色观察评分为“优”支架经DAPI染色验证其内部细胞残留量评分也为“优”;其三维结构完整,其孔径均值为9.07 μm;含水率为(228.14±19.39)％;孔隙率为(71.82±2.10)％;在胰酶中,第20 h的酶解率平均为(35.904±1.911)％;免疫组化分析鉴定细胞外基质中包含一定的黏多糖.对照组中正常脊髓经HE染色和DAPI染色观察到大量细胞;三维网孔状结构,孔径均值为40.7 μm;含水率和孔隙率分别为(109.32 ±12.44)％和(61.18±4.19)％;在胰酶中,第20 h的酶解率平均为(25.704±1.030)％;细胞外基质中包含大量的黏多糖成分.[结论]EDC交联结合化学萃取法制备的支架脱细胞彻底、制备效率高,具有三维网状结构、良好的含水率、空隙率、抗酶解性,一定程度上保留细胞外基质中黏多糖成分,符合组织工程学支架制备要求,为脊髓支架提供了一种新的选择.
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