【摘 要】
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探讨GST融合蛋白包涵体纯化的方法。将表达Rpfd与GST融合蛋白的质粒PGEX-4T1-Rpfd转入大肠杆菌DH5a,IPTG诱导表达目的蛋白。通过比较盐酸胍裂解和Novagen蛋白折叠试剂盒预处
【机 构】
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第四军医大学实验动物中心,西安市疾病预防与控制中心
【基金项目】
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国家自然科学基金(30972767);陕西省自然科学基金(2010JM4012)资助
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探讨GST融合蛋白包涵体纯化的方法。将表达Rpfd与GST融合蛋白的质粒PGEX-4T1-Rpfd转入大肠杆菌DH5a,IPTG诱导表达目的蛋白。通过比较盐酸胍裂解和Novagen蛋白折叠试剂盒预处理,及调整不同类型蛋白复性液,观察上述因素对GST融合蛋白包涵体纯化效果的影响。结果:超声后先去除可溶性表达,再使用20 mmol Tris-HCl和0.1 mmol DTT进行复性,可获得高效纯化,具有活性的GST融合蛋白。对于GST包涵体蛋白进行纯化时,去除可溶性表达蛋白,改变蛋白复性液的成分,可有效提高蛋白纯化效果。
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