去白细胞富血小板血浆对距骨骨软骨损伤的疗效及机制研究

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目的探讨去白细胞富血小板血浆(pure platelet-rich plasma,P-PRP)对距骨骨软骨损伤的治疗效果及机制。方法将2014年1月—2017年10月收治的符合选择标准的36例距骨骨软骨损伤患者,按随机数字表法随机分为对照组(A组)、富白细胞PRP(leukocyte PRP,L-PRP)组(B组)、P-PRP组(C组),每组12例。3组患者性别、年龄、病程、Hepple分型等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。B、C组分别于植骨处注射2.5 mL L-PRP和P-PRP,A组不注射任何药物。术前和术后3、6、12个月采用美国矫形足踝协会(AOFAS)踝-后足评分和疼痛视觉模拟评分(VAS)评价疗效。P-PRP治疗机制研究:将MC3T3-E1细胞随机分为对照组(A组)、L-PRP组(B组)、P-PRP组(C组),B、C组分别用含5%L-PRP或P-PRP的培养液进行培养,A组用相同含量PBS培养。采用MTT法检测细胞增殖情况,ELISA法检测上清液基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein 9,MMP-9)蛋白含量,测定细胞ALP活性,实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测细胞中骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、Ⅰ型胶原和MMP-9 mRNA的表达,Western blot检测上清液MMP-9和细胞中磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,pAKT)、磷酸化c-Jun(phosphorylated c-Jun,p-c-Jun)蛋白表达。结果各组患者均获随访,随访时间13~25个月,平均18个月。无伤口感染、内固定失效等并发症发生。MRI检查示,术前各组损伤程度相似,术后6个月各组均获康复,且C组优于A、B组。术后各时间点各组AOFAS评分和VAS评分均较术前显著改善(P<0.05);术后3、6、12个月C组AOFAS评分均显著高于A、B组(P<0.05);VAS评分各组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。P-PRP治疗机制研究:C组细胞增殖吸光度(A)值、ALP活性、OPN和Ⅰ型胶原mRNA相对表达量显著大于A、B组,B组大于A组,差异均有统计学意义(P<0.05)。B组MMP-9蛋白和mRNA相对表达量以及ELISA检测MMP-9蛋白含量显著大于A、C组,C组小于A组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测示B组PI3K、pAKT、pc-Jun蛋白相对表达量显著大于A、C组,差异有统计学意义(P<0.05);A、C组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 P-PRP对距骨骨软骨损伤的治疗效果优于L-PRP,可能与抑制成骨细胞中PI3K/AKT/AP-1信号通路的激活,从而降低MMP-9的分泌有关。
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