人胰腺癌Hedgehog信号通路中膜蛋白受体PTCH的纯化

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目的 构建人胰腺癌PTCH基因表达载体并诱导融合蛋白表达。方法 从人胰腺癌细胞株SW1990抽提总RNA,经RT—PCR扩增出PTCH基因,经纯化、回收目的基因PTCH,将其插入表达载体pET22b,转化E.Coli BL21-CodonPlus^(TM)-RP,构建重组质粒pET22b/PTCH,IPTG诱导表达融合蛋白,免疫印迹进行鉴定,Ni-螯合亲和层析纯化融合蛋白。结果 从人胰腺癌细胞株SW1990克隆出长为789bp PTCH目的片段,成功构建重组质粒pET22b/PTCH,并诱导表达目的蛋白;
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