基于连接酶和磷酸化探针的单碱基突变检测方法研究

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该文发展了一种基于表面连接酶反应及生物金属化的电化学方法用于单碱基突变的检测。金电极表面先固定捕获探针,然后和待检测的突变链及5’端磷酸化的连接探针杂交,在连接酶存在下,表面固定的探针会和连接探针连接起来。如果表面固定的探针和目标链不匹配,则连接反应不能进行。在90℃下进行热变性处理,形成的双链解开,进行了连接反应的连接探针连接到了金电极上。接着,生物素化的检测探针和连接产物杂交,再和链亲和素化的碱性磷酸酶反应,在碱性磷酸酶的作用下,非还原性的抗坏血酸磷酸酯(AA-P)转化成还原性的抗坏血酸(AA)。溶液
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