【摘 要】
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【目的】通过克隆来源于糖丁基梭菌(Clostridium saccharobutylicum DSM13864)丁醇合成途径的关键酶基因(thl A,bcs-operon和adh E),构建产丁醇大肠杆菌。【方法】以Clostrid
【机 构】
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江南大学工业生物技术教育部重点实验室; 江南大学生物工程学院;
【基金项目】
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国家自然科学基金(21276112,31401634);江苏省自然科学基金(BK20140135,BK20150003)~~
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【目的】通过克隆来源于糖丁基梭菌(Clostridium saccharobutylicum DSM13864)丁醇合成途径的关键酶基因(thl A,bcs-operon和adh E),构建产丁醇大肠杆菌。【方法】以Clostridium saccharobutylicum DSM13864的基因组为模板,分别扩增丁醇途径关键酶基因thl A,bcs-operon(crt-bcd1-etf B2-fix B2-hbd)和adh E,构建了两个重组质粒p ETDuet-bcs和pRSFDuet-thl A-adh E,并成功转入E.coli JM109(DE3)实现异源表达,使大肠杆菌具备产丁醇能力。在半厌氧条件下进行重组菌的发酵,并研究不同培养基对产丁醇的影响。【结果】该重组菌在半厌氧条件下经摇瓶发酵丁醇产量达到25.4 mg/L,通过优化培养基后,在TB发酵培养基中丁醇产量可达到34.1 mg/L。【结论】通过构建重组共表达质粒,将糖丁基梭菌来源的丁醇途径关键酶基因在大肠杆菌中表达,成功构建产丁醇大肠杆菌。该研究提供了一株易于操作的丁醇发酵重组大肠杆菌,避免了传统梭菌发酵丁醇生产中苛刻的厌氧条件、易产孢子等限制问题。
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