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[摘要] 目的 探讨自身抗体在自身免疫性肝炎患者的诊断意义。方法 116例分为三组:自身免疫性肝炎(AIH)组31例,包括自身免疫性肝炎18例、原发性胆汁性肝硬化(PBC)10例、原发性硬化性胆管炎(PSC)3例;病毒性肝炎组60例;不明原因肝损伤组25例。分别用间接免疫荧光法、免疫印迹法检测抗核抗体(ANA);LKM-1:抗肝肾微粒体细胞色素P450IID6抗体;SLA/LP:抗可溶性肝抗原/抗肝胰抗原抗体;SMA:抗平滑肌抗体;AMA-M2:抗线粒体抗体。结果 抗SLA/LP抗体在AIH患者血清中的阳性率为44.4%,明显高于LKM(16.7%)、AMA-M2(22.2%)抗体,并且在病毒性肝炎患者血清中呈阴性反应。抗AMA-M2抗体在PBC患者血清中的阳性率为90.0%,抗gp-210抗体在PBC患者血清中阳性率为40.0%。结论 抗SLA/LP抗体对AIH具有特异性,AMA-M2抗体对PBC的诊断具有特异性,所以自身抗体的检测将有助于自身免疫性肝炎患者的诊断及治疗。
[关键词] 自身免疫性肝病;间接免疫荧光法;免疫印迹法
[中图分类号] R446.62[文献标识码] A[文章编号] 1673-9701(2010)02-87-02
自身免疫性肝炎(AIH)是一组病因不明、伴有明显的自身免疫现象、以炎症性坏死为主要病理改变的慢性肝脏疾病,主要包括自身免疫性肝炎(AIH)、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、原发性硬化性胆管炎(PSC)[1]。目前缺乏明确的诊断标准,而自身抗体的检测对此类疾病的诊断有重要意义。我们对116例免疫球蛋白、肝功能生化指标持续异常的各类肝病患者用间接免疫荧光法检测抗核抗体(ANA),免疫印迹法检测肝抗原自身抗体,探讨此类自身抗体在自身免疫性肝病中的临床意义。
1材料与方法
1.1研究对象
将2007年10月～2009年9月间来我院门诊及住院治疗的116例患者分为三组:①自身免疫性肝病组:参照国际自身免疫肝炎修订的评分标准,患者经肝穿病理检查证实分为AIH 18例,PBC 10例,PSC 3例。②病毒性肝炎组:包括20例甲型肝炎(HAV)、20例乙型肝炎(HBV)、20例丙型肝炎(HCV)。③原因不明肝损伤组25例(该组患者长期肝功能异常、各类病毒性肝炎指标阴性,但未做肝穿病理检查)。随机收集20例健康体检人员为正常对照。
1.2间接免疫荧光法(IIF)检测ANA
基质选用HEP-2细胞,试剂由德国欧蒙医学实验诊断实验股份公司提供。抽取患者空腹外周血,取10μL血清(1︰100稀释)滴加在抗原基质片上,置25℃孵育30min,PBS(PH 7.2)洗片,滴加异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗体30min洗片,荧光显微镜观察结果,血清稀释度>1︰100时组织或细胞内出现特异性的荧光判为阳性。
1.3免疫印迹法检测肝抗原自身抗体
肝抗原自身抗体包括LKM-1:抗肝肾微粒体细胞色素P450IID6抗体;SLA/LP:抗可溶性肝抗原/抗肝胰抗原抗体;SMA:抗平滑肌抗体;AMA-M2:抗线粒体抗体;gp-210抗体:将血清10μL加入1mL稀释液中与膜反应室温平摇30min,洗膜后加酶标记抗人IgG,室温平摇30min,洗膜后加显色平摇10min,用蒸馏水终止反应,用标准对照条带图观察特定区域条带,见清晰的强着色带判为阳性。
1.4ELISA法检测各类病毒性肝炎
抗HAV-IgM、HBsAg、抗HCV试剂盒由上海科华实业有限公司提供[2]。
2结果
2.1ANA的检出情况
在间接免疫荧光法检测中,自身免疫性肝病组、各类病毒性肝炎组、不明原因肝功损伤组及正常对照组的阳性率分别为58.1%、10%、24%及0。经χ2检验,自身免疫性肝炎组与各组之间显著性差异(P<0.01)[6],见表1。
AIH组中,抗SLA/LP抗体阳性率44.4%,均高于LKM-1抗体16.7%、gp-210抗体0、及抗AMA-M2抗体22.2%。在PBC组患者中有9例抗AMA-M2抗体阳性,阳性率达90.0%;2例PSC自身抗体均为阴性,在病毒性肝炎组及不明原因肝损伤中,抗gp-210、抗LKM-1、抗AMA-M2抗体阳性共有6例,这组患者中谷丙转氨酶(ALT)低于200U/L,黄疸指数在(25～78)μmoL/L,其中6例病毒性肝炎患者和6例不明原因肝损伤患者经自身免疫性肝炎诊断标准分析,符合病毒性肝炎合并AIH诊断。见表2。
3讨论
自身免疫性肝炎是一组具有相似临床表现的慢性免疫性肝病,以免疫指标和高丙种球蛋白和自身抗体为特征。同时也是一些激发因子、自身抗体、遗传倾向和免疫调节之间错综复杂的相互作用而打破自身耐受由自身免疫反应导致的持续性肝细胞损害,自身抗体不但可以作为该病的诊断指标而且与相应的靶抗原一道不失为诠释AIH致病的有效途径[4]。
近年来,国外报道自身免疫性肝炎有升高的趋势,我国是慢性肝炎的高发区,虽然以病毒性肝炎为主,但约有20%的患者病毒性肝炎的指标阴性,肝功能生化指标持续异常。随着自身抗体检测手段的不断提高,自身免疫性肝炎的患者逐渐增多。本研究中自身免疫性肝病组自身抗体检出率明显高于其他组,ANA检出在自身免疫性肝病组中占58.1%,各类病毒性肝炎组占10%,不明原因肝损伤组占24%,其中AIH患者阳性率最高72.2%,核型以胞浆型、颗粒型为主,其次PBC组66.7%。抗SLA/LP抗体目前被认为是AIH的特异性抗体,SLA/LP是肝细胞浆内的一种不知名的可溶性蛋白,其相应抗体是AIH的特异性抗体。我们研究的AIH患者抗SLA/LP抗体阳性率占44.4%,非AIH组及各病毒性肝炎组患者均为阴性,故抗SLA/LP抗体对自身免疫性I型肝炎具有特异性,可视为自身免疫性肝炎I型新的血清学指标。
抗LKM-1抗体的靶抗原为细胞色素单氧化酶P450 2D6,是构成自身免疫性肝炎II型的决定族,因与HCV病毒基因系列有部分同源性,抗LKM-1抗体约在5%慢性丙性肝炎患者血清中出现。本研究中AIH组和HCV患者组中检出女性、男性患者各1例为阳性,其AIH患者抗体滴度明显大于HCV患者,同时这2例患者抗SLA/LP抗体和AMA-M2抗体检测均为阴性,与国外报道抗LKM-1抗体阳性时,SLA/LP和AMA-M2抗体阴性结果一致[5]。
PBC是一种以自身免疫介导的肝内胆管损伤,最终导致肝功能衰竭为特征的一类肝脏疾病,AMA是PBC重要的免疫学诊断指标,其中M2型AMA对PBC有高度的敏感性和特异性。本检测中PBC组患者AMA-M2阳性率达90.0%,明显高于非PBC组,与Heathcte等报道的结果相符,表明AMA-M2抗体是诊断PBC的特异性指标。此外在ANA的检测中PBC患者阳性率出现最多66.7%,荧光核型主要以颗粒型、胞浆型为主。在不明原因肝损伤组中,自身抗体阳性率为24.0%,说明在不明原因肝损伤患者中,可能存在自身免疫性疾病。
综上所述,随着自身抗体检测技术的不断改进及其应用的不断普及,肝抗原自身抗体检测在自身免疫性肝炎的诊断中占重要地位,不明原因肝损伤患者及时检测ANA、AMA、LKM-1、SLA/LP、gp-210自身抗体将有助于疾病的的诊断及鉴别诊断,可使更多的自身免疫性肝病患者得到早期正确的治疗。
[参考文献]
[1] 刘小平,罗海峰,李建英,等.自身免疫性肝炎患者血清RF、ANA、AMA、ASMA检测与分析[J]. 国外医学:临床生物化学与检验学分册,2005,26(4):196-197.
[2] 蒋明. 自身抗体测定对诊断自身免疫性肝病的临床意义[J]. 中国实用内科杂志,2002,22(1):48-51.
[3] 贾继尔. 自身抗体检测在自身免疫性肝病诊断中的应用[J]. 中华检验医学杂志,2003,26(2):120-122.
[4]王锐,闫吉. 自身抗体检测在诊断自身免疫性肝炎中的应用价值[J]. 中国实用内科杂志,2005,25(3):265.
[5] 王景泉,崔世昌,闫惠平,等. 自身免疫性肝炎自身抗体检测情况的临床观察[J]. 临床胆肝病杂志,2004,20(1):12-13.
[6] 王全楚,张燕,申德林,等. 检测肝组织自身抗体诊断自身免疫性肝炎[J]. 实用医药杂志,2005,25(5):551-552.
(收稿日期:2009-09-08)
[关键词] 自身免疫性肝病;间接免疫荧光法;免疫印迹法
[中图分类号] R446.62[文献标识码] A[文章编号] 1673-9701(2010)02-87-02
自身免疫性肝炎(AIH)是一组病因不明、伴有明显的自身免疫现象、以炎症性坏死为主要病理改变的慢性肝脏疾病,主要包括自身免疫性肝炎(AIH)、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、原发性硬化性胆管炎(PSC)[1]。目前缺乏明确的诊断标准,而自身抗体的检测对此类疾病的诊断有重要意义。我们对116例免疫球蛋白、肝功能生化指标持续异常的各类肝病患者用间接免疫荧光法检测抗核抗体(ANA),免疫印迹法检测肝抗原自身抗体,探讨此类自身抗体在自身免疫性肝病中的临床意义。
1材料与方法
1.1研究对象
将2007年10月～2009年9月间来我院门诊及住院治疗的116例患者分为三组:①自身免疫性肝病组:参照国际自身免疫肝炎修订的评分标准,患者经肝穿病理检查证实分为AIH 18例,PBC 10例,PSC 3例。②病毒性肝炎组:包括20例甲型肝炎(HAV)、20例乙型肝炎(HBV)、20例丙型肝炎(HCV)。③原因不明肝损伤组25例(该组患者长期肝功能异常、各类病毒性肝炎指标阴性,但未做肝穿病理检查)。随机收集20例健康体检人员为正常对照。
1.2间接免疫荧光法(IIF)检测ANA
基质选用HEP-2细胞,试剂由德国欧蒙医学实验诊断实验股份公司提供。抽取患者空腹外周血,取10μL血清(1︰100稀释)滴加在抗原基质片上,置25℃孵育30min,PBS(PH 7.2)洗片,滴加异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗体30min洗片,荧光显微镜观察结果,血清稀释度>1︰100时组织或细胞内出现特异性的荧光判为阳性。
1.3免疫印迹法检测肝抗原自身抗体
肝抗原自身抗体包括LKM-1:抗肝肾微粒体细胞色素P450IID6抗体;SLA/LP:抗可溶性肝抗原/抗肝胰抗原抗体;SMA:抗平滑肌抗体;AMA-M2:抗线粒体抗体;gp-210抗体:将血清10μL加入1mL稀释液中与膜反应室温平摇30min,洗膜后加酶标记抗人IgG,室温平摇30min,洗膜后加显色平摇10min,用蒸馏水终止反应,用标准对照条带图观察特定区域条带,见清晰的强着色带判为阳性。
1.4ELISA法检测各类病毒性肝炎
抗HAV-IgM、HBsAg、抗HCV试剂盒由上海科华实业有限公司提供[2]。
2结果
2.1ANA的检出情况
在间接免疫荧光法检测中,自身免疫性肝病组、各类病毒性肝炎组、不明原因肝功损伤组及正常对照组的阳性率分别为58.1%、10%、24%及0。经χ2检验,自身免疫性肝炎组与各组之间显著性差异(P<0.01)[6],见表1。
AIH组中,抗SLA/LP抗体阳性率44.4%,均高于LKM-1抗体16.7%、gp-210抗体0、及抗AMA-M2抗体22.2%。在PBC组患者中有9例抗AMA-M2抗体阳性,阳性率达90.0%;2例PSC自身抗体均为阴性,在病毒性肝炎组及不明原因肝损伤中,抗gp-210、抗LKM-1、抗AMA-M2抗体阳性共有6例,这组患者中谷丙转氨酶(ALT)低于200U/L,黄疸指数在(25～78)μmoL/L,其中6例病毒性肝炎患者和6例不明原因肝损伤患者经自身免疫性肝炎诊断标准分析,符合病毒性肝炎合并AIH诊断。见表2。
3讨论
自身免疫性肝炎是一组具有相似临床表现的慢性免疫性肝病,以免疫指标和高丙种球蛋白和自身抗体为特征。同时也是一些激发因子、自身抗体、遗传倾向和免疫调节之间错综复杂的相互作用而打破自身耐受由自身免疫反应导致的持续性肝细胞损害,自身抗体不但可以作为该病的诊断指标而且与相应的靶抗原一道不失为诠释AIH致病的有效途径[4]。
近年来,国外报道自身免疫性肝炎有升高的趋势,我国是慢性肝炎的高发区,虽然以病毒性肝炎为主,但约有20%的患者病毒性肝炎的指标阴性,肝功能生化指标持续异常。随着自身抗体检测手段的不断提高,自身免疫性肝炎的患者逐渐增多。本研究中自身免疫性肝病组自身抗体检出率明显高于其他组,ANA检出在自身免疫性肝病组中占58.1%,各类病毒性肝炎组占10%,不明原因肝损伤组占24%,其中AIH患者阳性率最高72.2%,核型以胞浆型、颗粒型为主,其次PBC组66.7%。抗SLA/LP抗体目前被认为是AIH的特异性抗体,SLA/LP是肝细胞浆内的一种不知名的可溶性蛋白,其相应抗体是AIH的特异性抗体。我们研究的AIH患者抗SLA/LP抗体阳性率占44.4%,非AIH组及各病毒性肝炎组患者均为阴性,故抗SLA/LP抗体对自身免疫性I型肝炎具有特异性,可视为自身免疫性肝炎I型新的血清学指标。
抗LKM-1抗体的靶抗原为细胞色素单氧化酶P450 2D6,是构成自身免疫性肝炎II型的决定族,因与HCV病毒基因系列有部分同源性,抗LKM-1抗体约在5%慢性丙性肝炎患者血清中出现。本研究中AIH组和HCV患者组中检出女性、男性患者各1例为阳性,其AIH患者抗体滴度明显大于HCV患者,同时这2例患者抗SLA/LP抗体和AMA-M2抗体检测均为阴性,与国外报道抗LKM-1抗体阳性时,SLA/LP和AMA-M2抗体阴性结果一致[5]。
PBC是一种以自身免疫介导的肝内胆管损伤,最终导致肝功能衰竭为特征的一类肝脏疾病,AMA是PBC重要的免疫学诊断指标,其中M2型AMA对PBC有高度的敏感性和特异性。本检测中PBC组患者AMA-M2阳性率达90.0%,明显高于非PBC组,与Heathcte等报道的结果相符,表明AMA-M2抗体是诊断PBC的特异性指标。此外在ANA的检测中PBC患者阳性率出现最多66.7%,荧光核型主要以颗粒型、胞浆型为主。在不明原因肝损伤组中,自身抗体阳性率为24.0%,说明在不明原因肝损伤患者中,可能存在自身免疫性疾病。
综上所述,随着自身抗体检测技术的不断改进及其应用的不断普及,肝抗原自身抗体检测在自身免疫性肝炎的诊断中占重要地位,不明原因肝损伤患者及时检测ANA、AMA、LKM-1、SLA/LP、gp-210自身抗体将有助于疾病的的诊断及鉴别诊断,可使更多的自身免疫性肝病患者得到早期正确的治疗。
[参考文献]
[1] 刘小平,罗海峰,李建英,等.自身免疫性肝炎患者血清RF、ANA、AMA、ASMA检测与分析[J]. 国外医学:临床生物化学与检验学分册,2005,26(4):196-197.
[2] 蒋明. 自身抗体测定对诊断自身免疫性肝病的临床意义[J]. 中国实用内科杂志,2002,22(1):48-51.
[3] 贾继尔. 自身抗体检测在自身免疫性肝病诊断中的应用[J]. 中华检验医学杂志,2003,26(2):120-122.
[4]王锐,闫吉. 自身抗体检测在诊断自身免疫性肝炎中的应用价值[J]. 中国实用内科杂志,2005,25(3):265.
[5] 王景泉,崔世昌,闫惠平,等. 自身免疫性肝炎自身抗体检测情况的临床观察[J]. 临床胆肝病杂志,2004,20(1):12-13.
[6] 王全楚,张燕,申德林,等. 检测肝组织自身抗体诊断自身免疫性肝炎[J]. 实用医药杂志,2005,25(5):551-552.
(收稿日期:2009-09-08)