目的 研究miR-202对多发性骨髓瘤U266细胞中B细胞活化因子(BAFF)的调节作用及其机制.方法 通过生物信息学软件预测miR-202与BAFF的潜在结合位点,构建荧光素酶报告基因载体.将人类miR-202-3P模拟物(has-miR-202-3 P-mimics)、人类miR-202-3P抑制物(has-miR-202-inhibitor)、siBAFF及各自阴性对照转染U266细胞,采用实时荧光定量PCR和Western blot法验证miR-202对BAFF的调控作用,采用细胞增殖实验和流式细胞仪检测转染后U266细胞的增殖能力和凋亡情况.结果 未转染组、has-miR-202-3 P-mimics转染组、has-miR-202-3 P-inhibitor转染组和siBAFF转染组U266细胞中BAFF mRNA的相对表达量分别为1.040±0.057、0.573±0.073、1.205±0.097和0.368±0.052.与未转染组比较,has-miR-202-3 P-mimics转染组和siBAFF转染组U266细胞中BAFF mRNA的表达明显下调(P<0.05).Western blot法检测BAFF蛋白的表达结果与mRNA基本一致.未转染组、has-miR-202-3 P-mimics转染组、has-miR-202-3 P-inhibitor转染组和siBAFF转染组U266细胞的A450nm值分别为1.063±0.052、0.714 ±0.045、0.936±0.066和0.764±0.053.与未转染组比较,has-miR-202-3 P-mimics转染组和siBAFF转染组U266细胞的A450nm值明显降低(P<0.05).未转染组、has-miR-202-3 P-mimics转染组、has-miR-202-3 P-inhibitor转染组和siBAFF转染组U266细胞的凋亡率分别为26.2%、49.6%、21.1%和30.7%.与未转染组比较,has-miR-202-3P-mimics转染组U266细胞的凋亡率明显增加(P<0.05).has-miR-202DP-mimics转染组U266细胞中p-JNK蛋白的表达水平降低.结论 miR-202通过调节BAFF的表达对U266细胞发挥抑制增殖和诱导凋亡的作用.JNK/SAPK信号通路参与了miR-202对BAFF的调控作用.
miR-202对多发性骨髓瘤细胞中B细胞活化因子表达的调节作用及其机制
【摘 要】
:
目的 研究miR-202对多发性骨髓瘤U266细胞中B细胞活化因子(BAFF)的调节作用及其机制.方法 通过生物信息学软件预测miR-202与BAFF的潜在结合位点,构建荧光素酶报告基因载体.将人类miR-202-3P模拟物(has-miR-202-3 P-mimics)、人类miR-202-3P抑制物(has-miR-202-inhibitor)、siBAFF及各自阴性对照转染U266细胞,采用
【机 构】
:
(215006苏州大学附属第一医院检验科),(226001江苏省南通大学附属医院外科综合实验室),(226001江苏省南通大学附属医院检验医学中心),(226001江苏省南通大学附属医院外科综合实验室
【出 处】
:
中华肿瘤杂志
【发表日期】
:
2013年35期
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