目的探讨长时间不同强度负压对兔BMSCs成骨分化及增殖的影响。方法取4~6月龄新西兰大白兔股骨骨髓,采用密度梯度离心法分离培养BMSCs,并行流式细胞术及成骨诱导鉴定。取第3代细胞采用成骨诱导培养基诱导培养,并加载不同强度负压,分别为0、75、150 mm Hg(1 mm Hg=0.133 k Pa)(对照组、低负压组、高负压组);负压时间为30 min/h。倒置显微镜下观察细胞生长状态,绘制细胞生长曲线;诱导3、7、14d采用ELISA法检测细胞ALP活性,14d采用实时荧光定量PCR及Western blot检测各组Ⅰ型胶原、骨钙素(osteocalcin,OC)基因及蛋白表达。结果经流式细胞仪及成骨诱导鉴定所培养细胞为BMSCs;第3代BMSCs为典型的长梭形和不规则形。诱导4d,高负压组细胞显著少于对照组及低负压组(P<0.05),低负压组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);5~7d 3组间细胞数比较差异均有统计学意义(P<0.05),负压越大细胞增殖受抑制越明显。ALP活性检测示,诱导3d各组间比较差异无统计学意义(P>0.05);7d,仅高负压组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);14d,3组间比较差异均有统计学意义(P<0.05),负压越大ALP活性越高。实时荧光定量PCR及Western blot检测示,低负压组及高负压组Ⅰ型胶原和OC m RNA及蛋白表达量均显著高于对照组,高负压组高于低负压组,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论随负压增高,兔BMSCs成骨能力逐渐增强,而细胞增殖能力逐渐受抑制。