甲醇酵母Pichia pastoris高水平表达有活性的辣根过氧化物酶

来源 :生物化学与生物物理进展 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xuan21456
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表达有活性的辣根过氧化物酶(HRP) 不仅可以深入揭示HRP 结构与功能及其生理作用规律, 而且为HRP的广泛需要提供新的来源. 为了在甲醇酵母P. pastoris 中成功表达, 将编码HRPC成熟肽的cDNA 构建到pPIC9 上, 再转化到P. pastoris 中, 筛选到了分泌表达非糖基化HRP 和高糖基化HRP( 分子质量超过100 ku) 两种主要产物的重组细胞株. 优化表达条件, 目标产物在摇瓶发酵液中高效表达, 可达4~6 g/L. 并且直接从发酵液中可获得具有活性的高糖基化HRP, 每毫升发酵液中酶活力约有2 U, 经初步的纯化HRP具有最大吸收峰403 nm .
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