【摘 要】
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目的 研究miR-200b-3p靶向VEGFA对肝癌MHCC-97H细胞的迁移、侵袭和上皮间质转化的作用及机制.方法 RT-qPCR检测正常肝细胞和肝癌细胞miR-200b-3p与VEGFA mRNA的表达,双荧光素
【机 构】
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延安市人民医院检验科 陕西省延安市,716000
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目的 研究miR-200b-3p靶向VEGFA对肝癌MHCC-97H细胞的迁移、侵袭和上皮间质转化的作用及机制.方法 RT-qPCR检测正常肝细胞和肝癌细胞miR-200b-3p与VEGFA mRNA的表达,双荧光素酶报告检测靶向关系,Transwell法检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,蛋白印迹法检测VEG-FA、E-carderin、N-carderin、p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT蛋白相对表达水平,裸鼠后肢腹侧皮下注射MH-CC-97H细胞悬液构建移植瘤,每5天检测移植瘤体积,第30天颈椎脱位法处死裸鼠,完整取出皮下肿瘤,电子天平称重,免疫组化检测E-cadherin表达情况,蛋白质印迹分析检测VEGFA、p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT蛋白表达水平.结果 miR-200b-3p在肝癌细胞中低表达,而VEGFA高表达,miR-200b-3p直接靶向负调控VEGFA;miR-200b-3p高表达明显减少每视野中肝癌细胞侵袭数目,降低肝癌细胞迁移能力,上调E-cadherin表达,下调N-cadherin、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达(P＜0.01);共转染VEGFA 高表达质粒或加入P13K/AKT激活剂都可逆转上述现象.结论 miR-200b-3p靶向VEGFA并调节PI3K/AKT信号通路抑制肝癌MHCC-97H细胞的迁移、侵袭和上皮间质转化.
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