【摘 要】
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目的:探讨慢病毒介导转染α1D-肾上腺素能受体（Adra1d）基因shRNA对大鼠主动脉血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）中Ca2+浓度及钙调蛋白（Ca M）表达的影响。方法:Ad
【机 构】
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山西医科大学体育教学部,山西医科大学基础医学院,山西医科大学公共卫生学院
【基金项目】
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山西省高等学校科技创新项目(No.2017146、No.2017147);山西省青年科技研究基金资助项目(No.201701D221247、No.201701D221259);山西医科大学博士启动基金资助项目(No.03201510、No.03201521);山西医科大学青年基金资助项目(No.02201604、No.02201613);山西医科大学教育教学改革创新项目(No.XJ201800
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目的:探讨慢病毒介导转染α1D-肾上腺素能受体（Adra1d）基因shRNA对大鼠主动脉血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）中Ca2+浓度及钙调蛋白（Ca M）表达的影响。方法:Adra1d基因shRNA与GV248载体拼接得到重组载体,经包装质粒共转染293T细胞,包装病毒,收集病毒原液,超速离心浓缩,并测定滴度得到重组慢病毒载体。用得到的重组慢病毒载体转染大鼠VSMCs,通过RT-q PCR和Western blot鉴定干扰效果,然后激光共聚焦检测VSMCs内Ca2+浓度变化,RT-q PCR和Western blot法检测VSMCs Ca M的mRNA和蛋白表达。结果:慢病毒载体构建成功;收集得到293T细胞分泌的病毒上清,测定病毒的滴度为3×1011TU/L。转染后大鼠主动脉VSMCs的Adra1d mRNA和蛋白表达量均显著下调。慢病毒Lv-shRNA4-Adr对目的基因Adra1d的干扰效率大于85%;Adra1d基因被靶向沉默后,与scrambled组相比,大鼠主动脉VSMCs的Ca2+荧光强度显著升高,而且Ca M的mRNA和蛋白表达量也显著增加。结论:慢病毒介导转染Adra1d基因shRNA可显著增加大鼠主动脉VSMCs中Ca2+浓度和Ca M表达。
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