【摘 要】
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3'-磷酸腺苷-5'-磷酰硫酸(PAPS)是生物肝素酶法制备途径的硫磺基供体,价格高且易分解.芳基硫磺基转移酶(ASTIV,EC 2.8.2.1)可以转化对硝基硫酸苯酯(PNPS)和3'-磷酸腺苷-5'-磷
【机 构】
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浙江大学化学工程与生物工程学系生物工程研究所,浙江杭州310027;山东金城生物药业有限公司,山东淄博255129;浙江大学-金城医药生物制药联合研究中心,浙江杭州310027
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3'-磷酸腺苷-5'-磷酰硫酸(PAPS)是生物肝素酶法制备途径的硫磺基供体,价格高且易分解.芳基硫磺基转移酶(ASTIV,EC 2.8.2.1)可以转化对硝基硫酸苯酯(PNPS)和3'-磷酸腺苷-5'-磷酸(PAP)生成PAPS.利用大肠杆菌系统高效可溶性表达ASTIV.对鼠源ASTIV基因序列进行密码子优化并全合成;转入大肠杆菌BL21 (DE3)中诱导表达;对表达条件进行优化,提高可溶表达量;Ni2亲和层析纯化目标蛋白,重组ASTIV产量达到80 mg/L,纯度高达95.3％,比酶活为42.5 mU/mg;用碱性磷酸酶(CIAP)转化ASTIV构型,比酶活进一步提高到85.0 mU/mg.该研究为ASTIV重组表达,PAPS酶法制备以及生物肝素合成奠定了坚实的基础.
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