【摘 要】
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目的观察RNAi技术抑制X染色体连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibit apoptosis protein,XIAP)基因对MG63细胞凋亡及化疗药物敏感性的影响,并探讨其分子机制。方法构建XIAP基因
【机 构】
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湖南省人民医院创伤外科,湖南省人民医院临床医学研究所,
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目的观察RNAi技术抑制X染色体连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibit apoptosis protein,XIAP)基因对MG63细胞凋亡及化疗药物敏感性的影响,并探讨其分子机制。方法构建XIAP基因的shRNA稳定表达载体,将MG63细胞分为空白组(A组,不作转染),阴性对照空白质粒转染组(B组,psiRNA-Con转染组),实验组(C组,psiRNA-XIAP转染组),在此基础上又设A+阿霉素(doxorubicin,Dox,0.3μmol)、C+Dox两化疗药物干预组;Western blot检测XIAP蛋白的表达,MTT检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期、凋亡及Caspase-9蛋白的表达情况。结果与A、B组比较,C组细胞XIAP蛋白水平、细胞增殖活性明显降低(P<0.05),细胞凋亡率、Caspase-9蛋白表达及G2/M期细胞明显增多(P<0.05)。A+Dox组较C+Dox组细胞增殖活性更低,且Dox对A、C组细胞的抑制呈时间依赖性;Caspase-9蛋白表达明显增高(P<0.05);细胞周期出现G2/M为0,细胞阻断于S期。结论 RNAi能有效抑制XIAP基因表达,抑制骨肉瘤细胞增殖活性,诱导其凋亡,并增加其对化疗药物的敏感性,其机制可能涉及抑制DNA合成及Caspase家族凋亡信号转导通路的活化。
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