【摘 要】
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目的初步探讨microRNA-218在人骨肉瘤中的抗肿瘤作用及其分子机制。方法利用qRT-PCR检测68例人骨肉瘤组织和癌旁组织中miR-218的表达水平。将miR-218模拟物或抗miR-218模拟物
【机 构】
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蚌埠医学院人体解剖学教研室; 蚌埠医学院化学教研室; 蚌埠医学院第一附属医院骨科;
【基金项目】
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Supported by Key Science Research Project Funding of Education Department of Anhui Province(KJ2017A211);General Science Research Project Funding of Education Department of Anhui Province(KJ2013Z216)
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目的初步探讨microRNA-218在人骨肉瘤中的抗肿瘤作用及其分子机制。方法利用qRT-PCR检测68例人骨肉瘤组织和癌旁组织中miR-218的表达水平。将miR-218模拟物或抗miR-218模拟物转染入人骨肉瘤Saos-2细胞,通过CCK-8、Annexin V-FITC和Western blotting检测转染后的细胞活性、细胞凋亡和C-PARP蛋白表达水平。利用luciferase assay筛选和识别miR-218的作用靶点及具体作用位点,进一步通过qRT-PCR和Western blotting检测转染miR-218模拟物或抗miR-218模拟物后Saos-2细胞中BMI-1基因和蛋白的表达水平。结果人骨肉瘤组织中的miR-218表达水平明显低于癌旁组织。CCK-8结果显示,与对照组相比,转染miR-218模拟物24、36和48 h后的Saos-2细胞活性显著降低,而转染抗miR-218模拟物的Saos-2细胞活性则显著增高。同时,转染miR-218模拟物组的C-PARP的蛋白表达水平较转染抗miR-218模拟物组和对照组明显增强。Annexin V-FITC凋亡检测结果显示,转染miR-218模拟物组的细胞凋亡数和凋亡率较对照组显著增加。此外,luciferase assay结果显示Saos-2细胞中miR-218的特异性作用靶点为BMI-1,在miR-218过表达时BMI-1的基因和蛋白表达水平明显被抑制,而miR-218敲除时则显著增强;miR-218可通过直接结合BMI-1 3’-UTR抑制BMI-1的表达。结论 miR-218可能通过下调BMI-1水平促进人骨肉瘤细胞Saos-2细胞凋亡,进而发挥其抗肿瘤作用。
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