人Robo4基因的重组腺病毒载体的构建及鉴定

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目的 构建人Robo4(h Robo4)基因的重组腺病毒表达载体,为研究Robo4的功能和作用机制以及Robo4的基因治疗奠定基础.方法 采用DNA重组与细菌内同源重组技术,通过PCR方法以hRobo4的表达质粒为模板扩增得到hRobo4的编码序列,克隆到穿梭质粒pDC316-hRobo4中,经测序验证后,将骨架质粒(pBHGlox E1)和穿梭质粒共转染到HEK293细胞中,同源重组产生重组腺病毒;包装收获病毒颗粒;PCR鉴定该重组腺病毒是否携带目的 基因.结果 PCR及限制性内切酶酶切鉴定表明成功构建携带人Robo4基因的腺病毒载体.结论 运用同源重组技术能够构建携带人Robo4基因的重组腺病毒载体.
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