【摘 要】
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目的 表达流行性乙型脑炎病毒(EEBV)的囊膜蛋白(E蛋白),制备该蛋白特异性兔抗血清,为建立诊断EEBV感染的检测方法奠定基础.方法 将pET32a-E质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)细胞,以终浓度为0.5 mmol·L-1的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷于37℃下诱导蛋白表达8 h,在8 mol·L-1尿素变性条件下,采用镍离子金属螯合亲和层析法对重组E蛋白进行纯化.透析复性后,以E蛋白为免疫原免疫新西兰兔制备兔抗血清,采用Western blot、酶联免疫吸附试验和免疫荧光分析法检测免疫血清中EEB
【机 构】
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新乡医学院公共卫生学院,河南 新乡 453003;新乡学院生命科学与基础医学学院,河南 新乡 453003
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目的 表达流行性乙型脑炎病毒(EEBV)的囊膜蛋白(E蛋白),制备该蛋白特异性兔抗血清,为建立诊断EEBV感染的检测方法奠定基础.方法 将pET32a-E质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)细胞,以终浓度为0.5 mmol·L-1的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷于37℃下诱导蛋白表达8 h,在8 mol·L-1尿素变性条件下,采用镍离子金属螯合亲和层析法对重组E蛋白进行纯化.透析复性后,以E蛋白为免疫原免疫新西兰兔制备兔抗血清,采用Western blot、酶联免疫吸附试验和免疫荧光分析法检测免疫血清中EEBV特异性抗体.结果 成功表达了重组E蛋白,经纯化、复性后可从1 L培养物中获得23.8 mg具有生物活性的E蛋白,该蛋白能与抗EEBV单抗发生特异反应.免疫制备的兔抗血清能与E蛋白发生特异反应,抗体效价高达1×51200;兔抗血清能与EEBV感染的细胞发生特异反应.结论 成功表达了EEBV E蛋白并制备了特异性强、亲和力高的兔抗血清,为建立诊断EEBV感染的免疫学检测方法、有效防控流行性乙型脑炎奠定了基础.
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