【摘 要】
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目的: 用巴氏毕赤酵母表达抗角蛋白抗体Fab段并优化表达条件.方法: 将抗角蛋白人Fab原核表达载体p3MH/Fab中的κ链和Fd段基因, 分别亚克隆到酵母菌表达载体pPIC9K和pPICZαA
【机 构】
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第四军医大学西京医院全军皮肤性病中心,广州军区广州总医院皮肤科
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目的: 用巴氏毕赤酵母表达抗角蛋白抗体Fab段并优化表达条件.方法: 将抗角蛋白人Fab原核表达载体p3MH/Fab中的κ链和Fd段基因, 分别亚克隆到酵母菌表达载体pPIC9K和pPICZαA中, 构建成重组质粒pPIC9K/L和pPICZαA/Fd并测序鉴定.将重组质粒pPIC9K/L和pPICZαA/Fd分步整合到酵母菌GS115的染色体上, 经G418和Zeocin筛选得到高拷贝的转化子.对Mut表型鉴定后, 优化pH及甲醇浓度等表达条件.结果: 优化表达条件后, 成功地表达抗角蛋白Fab段抗体.Western blot分析证实, 表达产物具有良好的角蛋白结合活性和特异性.结论: 人源性抗角蛋白Fab段抗体在巴氏毕赤酵母菌中获得成功表达, 为其进一步的应用研究打下了基础.
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