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【摘要】目的分离血小板验证Bayer ADVIA 2120全自动血细胞分析仪的血小板线性范围。方法按ISO15189的EP6-A要求,从250份样本中分离血小板对血小板线性范围进行验证。结果任意混合多样本分离血小板取得高浓度血小板,Bayer ADVIA 2120检测血小板批内和天间不精密度为3.0%和3.6%,携带污染率为0.02%,血小板在21~4918×109/L范围内呈一项次线性关系。结论可不分血型混合血浆,通过分离、浓缩取得高浓度血小板;Bayer ADVIA 2120全自动血细胞分析仪检测血小板精密,线性良好,线性范围宽,携带污染率低,是一台检测血小板性能良好的全自动血细胞分析仪。
【关键词】Bayer ADVIA 2120;全自动血细胞分析仪;线性范围验证;血小板分离;多样本
Analysis of the linear range of the platelet separated from multi-samples at Bayer ADVIA 2120
WU Shao-zhen,DENG Kun-yi,MAI Wei-xia,et al.Boai Hospital of Zhong Shan city,Zhong Shan 528403,China
【Abstract】ObjectiveTo verify the linear range of the platelets at Bayer ADVIA 2120 analyzer.MethodsAccording to ISO15189 EP6-A,platelet separated from 250 samples to verify the linear range at Bayer ADVIA 2120 analyzer.ResultsHigh concentrations of platelet can obtained from mixing multi samples.Coefficient of Variance of within-run and between-day was3.0% and 3.6%,carry-over was0.02%,platelet range at 21-4918 × 109/L Showed a linear relationship.ConclusionRegardless of blood type,high concentrations of platelet can obtained from mixing multi samples.Bayer ADVIA 2120 automated hematology analyzer has good feafures of precision,linearity,low carry-over,is a perfect performance analyzer.
【Key words】
Bayer ADVIA 2120;Full-automatic blood cell’s analyzer; The linear range ; Separation of platelets; Multi-samples
根据ISO15189医学实验室认可和《医疗机构临床实验室管理办法》规定,仪器在进行临床样本检测前,需进行全面的性能评价,因此我们按国际血液学标准化委员会(ICSH)指南[1]从不精密度、不准确度、线性范围、携带污染率等几个方面对Bayer ADVIA 2120全自动血细胞分析仪的血小板线性范围进行了验证,由于该仪器血小板的线性范围为0-3500×109/L,线性范围极宽,高浓度血小板极难收集,在线性验证过程中困难重重,现介绍一种简单易行且易于操作的方法供大家参考。
1材料和方法
1.1仪器Bayer ADVIA 2120全自动血细胞分析仪;仪器使用其配套的试剂、校准品和质控全血。
1.2样本本院体检中心EDTA-K2抗凝全血样本。
1.3实验方法
1.3.1不精密度评价
1.3.1.1批内不精密度CV%要求不大于CLIA,88[2]要求的总误差的1/4即6.25%;取本院体检中心EDTA-K2抗凝全血样本10份,每份样本检测2次,得到X1和χ2,用双份检测标准差来表示检测反映的离散程度。
1.3.1.2天间不精密度采用配套质控全血,连续检测20 d,计算均值、标准差和变异系数。
1.3.2不准确度评价采用ADVIA 2120与通过卫生部临检中心室间质评取得优良成绩的CD1700血液分析仪进行比对评价,比对时间为5 d,共做40份标本,每天做8份当天新鲜标本,所有实验在2 h内完成。尽可能使50%的比对标本不在参考区间内,各个标本分析物含量越宽越好。各实验结果点于X、Y座标纸上,图中标出斜率为1通过零点的直线。要求r≥0.975或r2≥0.95。线性回归统计Y=bX+ab代表斜率,a代表截距。根据PLT临床使用要求,在各个临床决定水平浓度Xc处(PLT通常以50/100/300/800)的浓度,了解Y方法引入后相对于X方法的系统误差(SE)。
SE=|Yc-Xc|=|(b-1)Xc+a |
计算Xc处系统误差,以系统误差(SE)≤1/2 CLIA,88允许误差即12.5%为标准,以Xc处SE符合不小于3个为该检测项目符合检验科准确度性能要求。
1.3.3线性范围验证评价①取当天新鲜体检EDTA-K2抗凝全血标本250份;②800转离心7 min,吸取上层富含PLT血浆混合(约150 ml分15支胶试管)备用;③富含PLT血浆800转离心7 min,底层RBC层弃去;吸取上层血浆混合,1500转离心10 min,吸出上层血浆再3000转离心10 min吸出上层血浆为L,混合底层 PLT层约3.5 ml为H;④以鞘液当样本检测3次归零,再连续H 3次、L 3次、0.1H+0.9L 2次、0.2H+0.8L 2次、0.3H+0.7L 2次、0.4H+0.6L 2次,0.5H+0.5L 2次,0.6H+0.4L 2次,0.7H+0.3L 2次,0.8H+0.2L 2次,0.9H+0.1L 2次,分别在2120上测定;⑤吸出H 5ul推成薄片,经瑞氏染色晾干后油镜观察;⑥对照试验:取体检中心EDTA-K2抗凝O型全血样本10份,重复②至③步骤,只留下底层约0.5 ml PLT层为H对照,在2120上测定2次,并吸出H对照5 μl推成薄片,经瑞氏染色晾干后油镜观察。
1.3.4携带污染参考有关文献[3]: 以鞘液当样本检测3次归零,再连续H 3次、L 3次,然后计算携带污染率,计算公式为:(L1-L3)/(H3-L3)×100%。
1.4统计学方法所有数据进行t检验;使用SPSS13.0统计分析软件进行多项式回归分析评价线性。
2结果
2.1精密度试验Bayer ADVIA 2120全自动血细胞分析仪PLT批内不精密度CV为3.0%,天间不精密度CV为3.6%,CV%均小于6.25%,符合总误差不大于1/4CLIA,88的要求。
表1
Bayer ADVIA 2120 PLT精密度
项目1/4CLIA,88(CV%)批内不精密度(CV%)天间不精密度(CV%)
PLT6.253.03.6
2.2不准确度试验ADVIA 2120全自动血细胞分析仪与CD1700血液分析仪进行PLT比对,r为0.981,r2为0.962,Xc处系统误差符合检验科准确度性能要求。
表2
Bayer ADVIA 2120 PLT准确度
仪器T检验回归方程(Y=)SE=|(b-1)Xc+a|Xc处系统误差(%)符合性
21200.461Y=0.961X+3.697│(0.961-1)Xc+3.697│3.49/0.20/2.67/3.44符合
2.3线性范围验证评价
将浓缩的PLTH值、L值稀释成11个浓度后,将检测结果与预期值(见表3),用EP6-A[4]法的多项式回归分析评价线性(见表4)。ADVIA 2120 全自动血细胞分析仪PLT在21~4918×109/L范围内呈一项次线性关系。
表3
Bayer ADVIA 2120 PLT线性验证测定表
标本号1234567891011
测量值120568114416882256284333373850443049255428
测量值221577114716142237278033183837436549105431
均值21573114616522247281233283844439849185430
预期值21562110216432185272632663870434848895430
表4
Bayer ADVIA 2120 PLT多项式回归分析评价线性分析结果
阶别系数数值系统误差t检验回归标准误自由度
1st b1549.2333.363163.34026.04620
2ndb2-2.5061.234-2.03121.65519
3rdb2-1.7999.515-0.189
3rdb3-0.0470.628-0.07523.70918
2.4对照试验H管涂片镜下见WBC、RBC偶见,PLT极为多见,单个散在分布,结构基本完整,形态基本正常,片尾见少量PLT聚集,形态结构基本正常,与仪器检测显示WBC:1.5×109/L;RBC:0.27×1012/L;PLT:5430×109/L和警告提示PLT聚集“1+”相符;H对照管涂片镜下见WBC、RBC偶见,PLT极多见,单个散在分布,结构基本完整,形态基本正常,片尾见少量PLT聚集,形态结构基本正常,与仪器检测显示WBC:1.2×109/L;RBC:0.21×1012/L;PLT:1150×109/L和警告提示PLT聚集“1+”相符。此试验证明血型不合对提取分离PLT无直接影响。
2.5携带污染结果PLT携带污染结果为0.02%,符合仪器显示<1%的性能要求。
3讨论
通过对Bayer ADVIA 2120全自动血细胞分析仪PLT的线性范围验证评价,得出其检测血小板的批内和天间不精密度分别为3.0%和3.6%,携带污染率为0.02%,与吴新忠等人报道的基本相符[3],符合ICSH标准和ISO15189的要求;线性范围宽,超出仪器说明书申明的线性范围,在21~4918×109/L范围内仍呈良好线性关系。
任意混合多样本分离、浓缩PLT成功的原因分析为:
3.1因PLT表面具有复杂的血型抗原,由遗传因素决定,可分为血小板非特异性抗原和血小板特异性抗原;非特异性特原与红细胞血型、HLA血型的抗原有关;特异性抗原由血小板特有的抗原簇组成,表现出血小板独特的遗传多态性,其抗原存在于PLT表面;正常健康人血小板抗体为阴性,因此ABO血型不合的多样本混合富含PLT的血浆中只有PLT抗原而无抗体,因此即可排除PLT因抗原抗体反应而发生凝集。
3.2因血液中的WBC存在大量的WBC抗原,而正常健康人血液中不含WBC抗体,如此也可排除WBC因抗原抗体反应发生凝集而干扰PLT的检测。
3.3在实验中经过步骤1.3.3中②即800转离心7 min和1.3.3中③的操作即含PLT血浆800转离心7 min,底层RBC层弃去后,血浆中只存在极少量的RBC和WBC,其抗原比例很少,而即使血浆中含有大量的抗ABO抗体,也达不到抗原抗体反应的最适比,因此也可排除RBC因抗原抗体反应发生凝集而干扰PLT的检测。
因此多样本任意混合富含PLT的血浆,可基本排除WBC、RBC和PLT凝集产生的干扰。H管和H对照管仪器均警告提示PLT聚集“1+”,与涂片片尾有少量PLT聚集相符;分析其原因与PLT的生理特性粘附、聚集、释放、收缩和高浓度相关,少量PLT聚集并没有对PLT检测造成大的干扰,观察聚集的PLT形态结构基本完整,分析其聚集属于第一时相的可逆聚集时相,对仪器PLT的检测影响较少,仪器仅显示PLT聚集“1+”。因此分离、浓缩PLT时采用多样本任意混合可收集到高浓度的PLT。
参考文献
[1]International Council for Standardization in Hematology.Guidelines for the evaluation of blood cell analyzerincluding those used for the differential leucocyteand reticulocyte counting and cell marker application.Prepared by the ICSH expert panal on cytometry.Clin Lab Haemat,1994,16:157-174.
[2]Department of Health and Human Services.Centersfor Medicare &Medicaid Services.
[3]吴新忠,庞鑫,罗福东,等.Bayer ADVIA 2120全自动血细胞分析仪的性能评价.现代医学仪器与应用,2007,19(6):62-64.
[4]NCCLS.EP6-A. Evaluation of the linearity of quantative analytical methods procedure:a statistical approach.Approved guideline,2003:1-60.
[5]杨冬燕,樊小蓉,潘冀雅,等.手工分离浓缩血小板的全过程质量控制.重庆医学,2007,36(21):2153-2154.
【关键词】Bayer ADVIA 2120;全自动血细胞分析仪;线性范围验证;血小板分离;多样本
Analysis of the linear range of the platelet separated from multi-samples at Bayer ADVIA 2120
WU Shao-zhen,DENG Kun-yi,MAI Wei-xia,et al.Boai Hospital of Zhong Shan city,Zhong Shan 528403,China
【Abstract】ObjectiveTo verify the linear range of the platelets at Bayer ADVIA 2120 analyzer.MethodsAccording to ISO15189 EP6-A,platelet separated from 250 samples to verify the linear range at Bayer ADVIA 2120 analyzer.ResultsHigh concentrations of platelet can obtained from mixing multi samples.Coefficient of Variance of within-run and between-day was3.0% and 3.6%,carry-over was0.02%,platelet range at 21-4918 × 109/L Showed a linear relationship.ConclusionRegardless of blood type,high concentrations of platelet can obtained from mixing multi samples.Bayer ADVIA 2120 automated hematology analyzer has good feafures of precision,linearity,low carry-over,is a perfect performance analyzer.
【Key words】
Bayer ADVIA 2120;Full-automatic blood cell’s analyzer; The linear range ; Separation of platelets; Multi-samples
根据ISO15189医学实验室认可和《医疗机构临床实验室管理办法》规定,仪器在进行临床样本检测前,需进行全面的性能评价,因此我们按国际血液学标准化委员会(ICSH)指南[1]从不精密度、不准确度、线性范围、携带污染率等几个方面对Bayer ADVIA 2120全自动血细胞分析仪的血小板线性范围进行了验证,由于该仪器血小板的线性范围为0-3500×109/L,线性范围极宽,高浓度血小板极难收集,在线性验证过程中困难重重,现介绍一种简单易行且易于操作的方法供大家参考。
1材料和方法
1.1仪器Bayer ADVIA 2120全自动血细胞分析仪;仪器使用其配套的试剂、校准品和质控全血。
1.2样本本院体检中心EDTA-K2抗凝全血样本。
1.3实验方法
1.3.1不精密度评价
1.3.1.1批内不精密度CV%要求不大于CLIA,88[2]要求的总误差的1/4即6.25%;取本院体检中心EDTA-K2抗凝全血样本10份,每份样本检测2次,得到X1和χ2,用双份检测标准差来表示检测反映的离散程度。
1.3.1.2天间不精密度采用配套质控全血,连续检测20 d,计算均值、标准差和变异系数。
1.3.2不准确度评价采用ADVIA 2120与通过卫生部临检中心室间质评取得优良成绩的CD1700血液分析仪进行比对评价,比对时间为5 d,共做40份标本,每天做8份当天新鲜标本,所有实验在2 h内完成。尽可能使50%的比对标本不在参考区间内,各个标本分析物含量越宽越好。各实验结果点于X、Y座标纸上,图中标出斜率为1通过零点的直线。要求r≥0.975或r2≥0.95。线性回归统计Y=bX+ab代表斜率,a代表截距。根据PLT临床使用要求,在各个临床决定水平浓度Xc处(PLT通常以50/100/300/800)的浓度,了解Y方法引入后相对于X方法的系统误差(SE)。
SE=|Yc-Xc|=|(b-1)Xc+a |
计算Xc处系统误差,以系统误差(SE)≤1/2 CLIA,88允许误差即12.5%为标准,以Xc处SE符合不小于3个为该检测项目符合检验科准确度性能要求。
1.3.3线性范围验证评价①取当天新鲜体检EDTA-K2抗凝全血标本250份;②800转离心7 min,吸取上层富含PLT血浆混合(约150 ml分15支胶试管)备用;③富含PLT血浆800转离心7 min,底层RBC层弃去;吸取上层血浆混合,1500转离心10 min,吸出上层血浆再3000转离心10 min吸出上层血浆为L,混合底层 PLT层约3.5 ml为H;④以鞘液当样本检测3次归零,再连续H 3次、L 3次、0.1H+0.9L 2次、0.2H+0.8L 2次、0.3H+0.7L 2次、0.4H+0.6L 2次,0.5H+0.5L 2次,0.6H+0.4L 2次,0.7H+0.3L 2次,0.8H+0.2L 2次,0.9H+0.1L 2次,分别在2120上测定;⑤吸出H 5ul推成薄片,经瑞氏染色晾干后油镜观察;⑥对照试验:取体检中心EDTA-K2抗凝O型全血样本10份,重复②至③步骤,只留下底层约0.5 ml PLT层为H对照,在2120上测定2次,并吸出H对照5 μl推成薄片,经瑞氏染色晾干后油镜观察。
1.3.4携带污染参考有关文献[3]: 以鞘液当样本检测3次归零,再连续H 3次、L 3次,然后计算携带污染率,计算公式为:(L1-L3)/(H3-L3)×100%。
1.4统计学方法所有数据进行t检验;使用SPSS13.0统计分析软件进行多项式回归分析评价线性。
2结果
2.1精密度试验Bayer ADVIA 2120全自动血细胞分析仪PLT批内不精密度CV为3.0%,天间不精密度CV为3.6%,CV%均小于6.25%,符合总误差不大于1/4CLIA,88的要求。
表1
Bayer ADVIA 2120 PLT精密度
项目1/4CLIA,88(CV%)批内不精密度(CV%)天间不精密度(CV%)
PLT6.253.03.6
2.2不准确度试验ADVIA 2120全自动血细胞分析仪与CD1700血液分析仪进行PLT比对,r为0.981,r2为0.962,Xc处系统误差符合检验科准确度性能要求。
表2
Bayer ADVIA 2120 PLT准确度
仪器T检验回归方程(Y=)SE=|(b-1)Xc+a|Xc处系统误差(%)符合性
21200.461Y=0.961X+3.697│(0.961-1)Xc+3.697│3.49/0.20/2.67/3.44符合
2.3线性范围验证评价
将浓缩的PLTH值、L值稀释成11个浓度后,将检测结果与预期值(见表3),用EP6-A[4]法的多项式回归分析评价线性(见表4)。ADVIA 2120 全自动血细胞分析仪PLT在21~4918×109/L范围内呈一项次线性关系。
表3
Bayer ADVIA 2120 PLT线性验证测定表
标本号1234567891011
测量值120568114416882256284333373850443049255428
测量值221577114716142237278033183837436549105431
均值21573114616522247281233283844439849185430
预期值21562110216432185272632663870434848895430
表4
Bayer ADVIA 2120 PLT多项式回归分析评价线性分析结果
阶别系数数值系统误差t检验回归标准误自由度
1st b1549.2333.363163.34026.04620
2ndb2-2.5061.234-2.03121.65519
3rdb2-1.7999.515-0.189
3rdb3-0.0470.628-0.07523.70918
2.4对照试验H管涂片镜下见WBC、RBC偶见,PLT极为多见,单个散在分布,结构基本完整,形态基本正常,片尾见少量PLT聚集,形态结构基本正常,与仪器检测显示WBC:1.5×109/L;RBC:0.27×1012/L;PLT:5430×109/L和警告提示PLT聚集“1+”相符;H对照管涂片镜下见WBC、RBC偶见,PLT极多见,单个散在分布,结构基本完整,形态基本正常,片尾见少量PLT聚集,形态结构基本正常,与仪器检测显示WBC:1.2×109/L;RBC:0.21×1012/L;PLT:1150×109/L和警告提示PLT聚集“1+”相符。此试验证明血型不合对提取分离PLT无直接影响。
2.5携带污染结果PLT携带污染结果为0.02%,符合仪器显示<1%的性能要求。
3讨论
通过对Bayer ADVIA 2120全自动血细胞分析仪PLT的线性范围验证评价,得出其检测血小板的批内和天间不精密度分别为3.0%和3.6%,携带污染率为0.02%,与吴新忠等人报道的基本相符[3],符合ICSH标准和ISO15189的要求;线性范围宽,超出仪器说明书申明的线性范围,在21~4918×109/L范围内仍呈良好线性关系。
任意混合多样本分离、浓缩PLT成功的原因分析为:
3.1因PLT表面具有复杂的血型抗原,由遗传因素决定,可分为血小板非特异性抗原和血小板特异性抗原;非特异性特原与红细胞血型、HLA血型的抗原有关;特异性抗原由血小板特有的抗原簇组成,表现出血小板独特的遗传多态性,其抗原存在于PLT表面;正常健康人血小板抗体为阴性,因此ABO血型不合的多样本混合富含PLT的血浆中只有PLT抗原而无抗体,因此即可排除PLT因抗原抗体反应而发生凝集。
3.2因血液中的WBC存在大量的WBC抗原,而正常健康人血液中不含WBC抗体,如此也可排除WBC因抗原抗体反应发生凝集而干扰PLT的检测。
3.3在实验中经过步骤1.3.3中②即800转离心7 min和1.3.3中③的操作即含PLT血浆800转离心7 min,底层RBC层弃去后,血浆中只存在极少量的RBC和WBC,其抗原比例很少,而即使血浆中含有大量的抗ABO抗体,也达不到抗原抗体反应的最适比,因此也可排除RBC因抗原抗体反应发生凝集而干扰PLT的检测。
因此多样本任意混合富含PLT的血浆,可基本排除WBC、RBC和PLT凝集产生的干扰。H管和H对照管仪器均警告提示PLT聚集“1+”,与涂片片尾有少量PLT聚集相符;分析其原因与PLT的生理特性粘附、聚集、释放、收缩和高浓度相关,少量PLT聚集并没有对PLT检测造成大的干扰,观察聚集的PLT形态结构基本完整,分析其聚集属于第一时相的可逆聚集时相,对仪器PLT的检测影响较少,仪器仅显示PLT聚集“1+”。因此分离、浓缩PLT时采用多样本任意混合可收集到高浓度的PLT。
参考文献
[1]International Council for Standardization in Hematology.Guidelines for the evaluation of blood cell analyzerincluding those used for the differential leucocyteand reticulocyte counting and cell marker application.Prepared by the ICSH expert panal on cytometry.Clin Lab Haemat,1994,16:157-174.
[2]Department of Health and Human Services.Centersfor Medicare &Medicaid Services.
[3]吴新忠,庞鑫,罗福东,等.Bayer ADVIA 2120全自动血细胞分析仪的性能评价.现代医学仪器与应用,2007,19(6):62-64.
[4]NCCLS.EP6-A. Evaluation of the linearity of quantative analytical methods procedure:a statistical approach.Approved guideline,2003:1-60.
[5]杨冬燕,樊小蓉,潘冀雅,等.手工分离浓缩血小板的全过程质量控制.重庆医学,2007,36(21):2153-2154.