【摘 要】
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目的:构建用于酵母双杂交的褐飞虱cDNA文库以及pGBKT7-NlPIGM诱饵载体,筛选与NlPIGM具有相互作用的蛋白.方法:以褐飞虱全虫mRNA为起始模板,采用CloneMiner构建褐飞虱cD-NA文库并通过涂布鉴定文库库容量和滴度,通过两步法构建pGBKT7-NlPIGM诱饵载体并鉴定重组诱饵载体的自激活活性及毒性,然后通过mating法筛选与NlPIGM具有相互作用的蛋白.结果:构建的初级cD-NA文库总库容为1.04×108 CFU,次级cDNA文库滴度为3.4×107 CFU/mL,重组率为
【机 构】
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中国计量大学生命科学学院浙江省生物计量及检验检疫技术重点实验室,浙江杭州310018
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目的:构建用于酵母双杂交的褐飞虱cDNA文库以及pGBKT7-NlPIGM诱饵载体,筛选与NlPIGM具有相互作用的蛋白.方法:以褐飞虱全虫mRNA为起始模板,采用CloneMiner构建褐飞虱cD-NA文库并通过涂布鉴定文库库容量和滴度,通过两步法构建pGBKT7-NlPIGM诱饵载体并鉴定重组诱饵载体的自激活活性及毒性,然后通过mating法筛选与NlPIGM具有相互作用的蛋白.结果:构建的初级cD-NA文库总库容为1.04×108 CFU,次级cDNA文库滴度为3.4×107 CFU/mL,重组率为100%,插入片段大小集中在750~2000 bp之间;pGBKT7-NlPIGM载体无自激活活性,对Y2H Gold酵母菌株无毒性.并筛选到9个能与NlPIGM互作的蛋白.结论:成功构建了可用于酵母双杂交的高质量褐飞虱cDNA文库及褐飞虱PIGM诱饵载体,并筛选到了能与N lPIGM互作的蛋白.
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