目的建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定大鼠脊髓和脑组织中利多卡因浓度。方法将16只大鼠随机分为实验组(n=8)蛛网膜下腔注入利多卡因15μL,10min后在麻醉下取脑及脊髓;空白组(n=8)在麻醉下取脑及脊髓;在以下条件下采用反相高效液相色谱法测定利多卡因浓度。结果大鼠脊髓中利多卡因浓度在0.365～14.6μg.mL-1范围内线性关系良好(r=0.9957,n=6),所测得低、中、高3种质量浓度的提取回收率分别为97.09%、103.38%、94.02%;平均回收率为(98.17±6.21)%,日内、日间RSD分别<7.45%和11.75%。脑组织中利多卡因浓度在0.365～14.6.g.mL-1范围内线性关系良好(r=0.9997,n=6),所测得低、中、高3种质量浓度的提取回收率分别为98.94%、103.89%、101.01%;平均回收率为(101.28±6.72)%,日内、日间RSD分别<7.35%和9.86%。结论此法简便、精确,适用于研究利多卡因浓度检测,可用于利多卡因椎管内麻醉的药代动力学检测。