论文部分内容阅读
摘 要：采用高效液相色谱法对头孢呋辛钠进行检测，本文从仪器以及试剂的选择入手，进一步分析了实验的具体过程以及效果，对于头孢呋辛钠的含量进行了具体的检测，并且加以探讨。希望通过本文的论述能够进一步优化测定过程，保证测定过程的稳定性。
关键词：高效液相色谱法；头孢呋辛钠；测定
本文中所检测的头孢呋辛钠属于二代抗生素，头孢呋辛钠可广泛用于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，适用于敏感细菌早晨的感染治疗，并对于治疗呼吸道感染、泌尿系统等具有重要的意义。通常情况下，这些问题都是由革兰氏阴性菌导致的。因此对头孢呋辛钠进行检测具有重要的意义，在治疗重大疾病的过程中只有严格控制头孢呋辛钠的含量，才能起到良好的治疗效果。本文主要通过高效液相色谱法对头孢呋辛钠的含量进行检测，采用国内较为普遍的C18柱测定，具有良好的效果。希望通过本文的论述能够为今后检测工作带来一定的帮助。
1 试剂与仪器的选择
在本实验中，选用某公司生产的Waters高效液相色谱仪，其中包含四个组成部分，一是501泵，二是486检测器，三是U6K进样器以及746数据处理机，对测定的最终结论起到了重要的帮助。在试剂的选用上，主要包括以下几项试剂，色谱纯为乙腈，分析纯为苔黑酚、醋酸钠与醋酸。英国某药厂提供了用于进行工作对照的对照品，而供试品则选取了两家药厂生产的头孢呋辛钠，分别为意大利以及英国的药厂。
2 色谱条件
色谱柱：SpherisorbC1810μ，4.6mm×200mm；流动相：0.1mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液（pH3.4）-乙腈（90：10）；流速：1ml/min；检测波长：254nm；进样量：10μl；柱温：室温。
3 实验方法
首先要对内标液进行制备。采用设备精良的称取600mg苔黑酚，并且将其放置在容量为200ml的量瓶中，加入适量的水后进行溶解，直至其稀释到应有的标准，达到指定的刻度。然后对供试液进行制备。同苔黑酚的称量一样，选择适量的头孢呋辛钠进行称取，标准值为50mg，将其放置在容量为100ml的量瓶中，然后进行稀释，直至达到标准的刻度为止，将稀释后的溶液进行摇匀处理。分别称量出不同容积的溶液放置在容量为50ml的量瓶中，再加入适量的内标液，容量为10ml，同样仿照先前的步骤进行稀释并且摇匀，随即取得相应标准的溶液，分别为0.02mg/ml；0.04mg/ml；0.06mg/ml；0.08mg/ml以及0.10mg/ml。
在色谱的条件下对试剂进行取样，并且严格规定进样的标准为10μl的供试液。并且确立出相应的线性关系，制定出横坐标以及纵坐标，其中横坐标是头孢呋辛钠所含有的浓度，而纵坐标为对照品峰面积以及内标峰面积之间的比值，确定出相应的直线回归方程，将头孢呋辛钠的浓度控制在0.02mg/ml以上，不超过0.10mg/ml。在确保线性关系良好的前提下，在这一范围中对头孢呋辛钠的含量进行测定。
仿照先前的制作方法，进行头孢呋辛钠的供试液制作，每毫升头孢呋辛钠的含量为0.05mg。反复将供试液进行进样处理，共进行6次，对峰面积的比值进行测定，其RSD为0.5%，证实具有良好的精密度。进而开展回收试验，在进行试验的过程中，需要提供试验品6份，每一份的溶液含量均为3ml，浓度为0.5mg/ml，将每一份试验品放置在容量为50ml的量瓶中，并且加入同样浓度的对照品溶液2ml，每个量瓶中所添加的对照品溶液含量都是一致的，在此基础上，再另外提取相应的供试品溶液以及对照品溶液各5ml，共2份，将其放置在容积为50ml的量瓶中，参照线性方程的方法进行检定，并且对试验结果进行详细的记录。对于试验值进行平均值的计算，结果为99.9%，其中RSD为0.8%，回收结果能够达到令人满意的要求。
进而对头孢呋辛钠的含量进行检测，选择适量的供试品以及对照品，各50ml，然后制成相应的供试品溶液以及对照品溶剂，每ml中所含有的头孢呋辛钠为0.5mg，以及0.6mg苔黑酚，采用高效液相色谱的检测方法对溶液进行测定，采用内标法对每10μl的进样进行计算，测得供试品中头孢呋辛钠的含量，将所有的测定结果记录在案。
4 检测结果
通过采用高效液相色谱检验的方式对头孢呋辛钠的含量进行测定，结果显示在保留时间上，头孢呋辛钠可以达到5.5min，而苔黑酚能够保留的时间为9.6min，二者所具有的分离度为4.6。如果对乙腈的含量进行变更，那么就会对头孢呋辛钠以及内标物的分离度产生一定的影响。
流动相中乙腈浓度增加，头孢呋辛钠和内标物峰的保留时间不同程度均缩短，两者分离度增加。乙腈浓度在9%以下，保留时间延长。分离度偏小：浓度大于13%，头孢呋辛钠保留时间太短，易受分解物干扰。乙腈浓度在9～13%范围内，两者都有合适的保留时间和分离度。本文采用的10%乙腈系统，一次测定12min即可完成。
将0.1mg/m1的头孢呋辛钠溶液室温放置3d，其溶液的颜色超过中国药典10号黄色标准比色液。取此溶液稀释成0.1mg/ml的溶液，在上述条件下进样，仅4min前有一小分解物峰，不影响测定。本文所推荐的色谱条件可反映头孢呋辛钠的稳定性。
含量测定项下的供试液，经室温放置，每小时测定含量，同时以新制对照液对照，结果表明供试液配制后，4h内测定结果几乎无变化，与0h相比仅差1以内，放置5h后测定的含量明显降低，因此配制后的供试藏宜在3h内测定为好。
本文推荐在常用的C18柱上的高效液相色谱法测定头孢呋辛钠的含量，方法简便，能反映稳定性，测定结果与USP法一致，可作常规检验用。
结束语
头孢呋辛钠为半合成第二代头孢类抗生素，广泛用于革兰氏阴性菌所致的呼吸道、泌尿系统等的感染。临床应用依靠进口，近年国内也有试制。含量测定方法日抗基为微生物法，操作繁琐费时；USP采用HPLC法，但使用的己烷基硅胶柱国内不普及我们改用国内常用的C18柱测定，并对流动相系统和线性范围等进行了试验，提出一种简便准确的方法，希望通过本文的检定能够为今后类似的实验作出一定的参考。
参考文献
[1]李艳霞，谢东坡，靳理军.单扫描示波极谱法测定针剂中头孢呋辛钠含量[J].分析科学学报，2012（5）.
[2]石杰，陶鹏丽，王瑞勇，杨鹏，孙冰冰，张倩.鲁米诺-高锰酸钾流动注射化学发光体系测定头孢呋辛钠[J].光谱实验室，2010（3）.
[3]王萍，胡晓，李文.RP-HPLC用于人血浆中头孢呋辛浓度的测定及其药代动力学的研究[J].江西医学院学报，2009（7）.
[4]刘晋平.注射用头孢呋辛钠[N].中国医药报，2009.
[5]刘川，赵颖颖，尹秋响，谢闯，王静康.头孢呋辛钠在水溶液中的降解动力学[J].化学工业与工程，2013，1.
关键词：高效液相色谱法；头孢呋辛钠；测定
本文中所检测的头孢呋辛钠属于二代抗生素，头孢呋辛钠可广泛用于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，适用于敏感细菌早晨的感染治疗，并对于治疗呼吸道感染、泌尿系统等具有重要的意义。通常情况下，这些问题都是由革兰氏阴性菌导致的。因此对头孢呋辛钠进行检测具有重要的意义，在治疗重大疾病的过程中只有严格控制头孢呋辛钠的含量，才能起到良好的治疗效果。本文主要通过高效液相色谱法对头孢呋辛钠的含量进行检测，采用国内较为普遍的C18柱测定，具有良好的效果。希望通过本文的论述能够为今后检测工作带来一定的帮助。
1 试剂与仪器的选择
在本实验中，选用某公司生产的Waters高效液相色谱仪，其中包含四个组成部分，一是501泵，二是486检测器，三是U6K进样器以及746数据处理机，对测定的最终结论起到了重要的帮助。在试剂的选用上，主要包括以下几项试剂，色谱纯为乙腈，分析纯为苔黑酚、醋酸钠与醋酸。英国某药厂提供了用于进行工作对照的对照品，而供试品则选取了两家药厂生产的头孢呋辛钠，分别为意大利以及英国的药厂。
2 色谱条件
色谱柱：SpherisorbC1810μ，4.6mm×200mm；流动相：0.1mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液（pH3.4）-乙腈（90：10）；流速：1ml/min；检测波长：254nm；进样量：10μl；柱温：室温。
3 实验方法
首先要对内标液进行制备。采用设备精良的称取600mg苔黑酚，并且将其放置在容量为200ml的量瓶中，加入适量的水后进行溶解，直至其稀释到应有的标准，达到指定的刻度。然后对供试液进行制备。同苔黑酚的称量一样，选择适量的头孢呋辛钠进行称取，标准值为50mg，将其放置在容量为100ml的量瓶中，然后进行稀释，直至达到标准的刻度为止，将稀释后的溶液进行摇匀处理。分别称量出不同容积的溶液放置在容量为50ml的量瓶中，再加入适量的内标液，容量为10ml，同样仿照先前的步骤进行稀释并且摇匀，随即取得相应标准的溶液，分别为0.02mg/ml；0.04mg/ml；0.06mg/ml；0.08mg/ml以及0.10mg/ml。
在色谱的条件下对试剂进行取样，并且严格规定进样的标准为10μl的供试液。并且确立出相应的线性关系，制定出横坐标以及纵坐标，其中横坐标是头孢呋辛钠所含有的浓度，而纵坐标为对照品峰面积以及内标峰面积之间的比值，确定出相应的直线回归方程，将头孢呋辛钠的浓度控制在0.02mg/ml以上，不超过0.10mg/ml。在确保线性关系良好的前提下，在这一范围中对头孢呋辛钠的含量进行测定。
仿照先前的制作方法，进行头孢呋辛钠的供试液制作，每毫升头孢呋辛钠的含量为0.05mg。反复将供试液进行进样处理，共进行6次，对峰面积的比值进行测定，其RSD为0.5%，证实具有良好的精密度。进而开展回收试验，在进行试验的过程中，需要提供试验品6份，每一份的溶液含量均为3ml，浓度为0.5mg/ml，将每一份试验品放置在容量为50ml的量瓶中，并且加入同样浓度的对照品溶液2ml，每个量瓶中所添加的对照品溶液含量都是一致的，在此基础上，再另外提取相应的供试品溶液以及对照品溶液各5ml，共2份，将其放置在容积为50ml的量瓶中，参照线性方程的方法进行检定，并且对试验结果进行详细的记录。对于试验值进行平均值的计算，结果为99.9%，其中RSD为0.8%，回收结果能够达到令人满意的要求。
进而对头孢呋辛钠的含量进行检测，选择适量的供试品以及对照品，各50ml，然后制成相应的供试品溶液以及对照品溶剂，每ml中所含有的头孢呋辛钠为0.5mg，以及0.6mg苔黑酚，采用高效液相色谱的检测方法对溶液进行测定，采用内标法对每10μl的进样进行计算，测得供试品中头孢呋辛钠的含量，将所有的测定结果记录在案。
4 检测结果
通过采用高效液相色谱检验的方式对头孢呋辛钠的含量进行测定，结果显示在保留时间上，头孢呋辛钠可以达到5.5min，而苔黑酚能够保留的时间为9.6min，二者所具有的分离度为4.6。如果对乙腈的含量进行变更，那么就会对头孢呋辛钠以及内标物的分离度产生一定的影响。
流动相中乙腈浓度增加，头孢呋辛钠和内标物峰的保留时间不同程度均缩短，两者分离度增加。乙腈浓度在9%以下，保留时间延长。分离度偏小：浓度大于13%，头孢呋辛钠保留时间太短，易受分解物干扰。乙腈浓度在9～13%范围内，两者都有合适的保留时间和分离度。本文采用的10%乙腈系统，一次测定12min即可完成。
将0.1mg/m1的头孢呋辛钠溶液室温放置3d，其溶液的颜色超过中国药典10号黄色标准比色液。取此溶液稀释成0.1mg/ml的溶液，在上述条件下进样，仅4min前有一小分解物峰，不影响测定。本文所推荐的色谱条件可反映头孢呋辛钠的稳定性。
含量测定项下的供试液，经室温放置，每小时测定含量，同时以新制对照液对照，结果表明供试液配制后，4h内测定结果几乎无变化，与0h相比仅差1以内，放置5h后测定的含量明显降低，因此配制后的供试藏宜在3h内测定为好。
本文推荐在常用的C18柱上的高效液相色谱法测定头孢呋辛钠的含量，方法简便，能反映稳定性，测定结果与USP法一致，可作常规检验用。
结束语
头孢呋辛钠为半合成第二代头孢类抗生素，广泛用于革兰氏阴性菌所致的呼吸道、泌尿系统等的感染。临床应用依靠进口，近年国内也有试制。含量测定方法日抗基为微生物法，操作繁琐费时；USP采用HPLC法，但使用的己烷基硅胶柱国内不普及我们改用国内常用的C18柱测定，并对流动相系统和线性范围等进行了试验，提出一种简便准确的方法，希望通过本文的检定能够为今后类似的实验作出一定的参考。
参考文献
[1]李艳霞，谢东坡，靳理军.单扫描示波极谱法测定针剂中头孢呋辛钠含量[J].分析科学学报，2012（5）.
[2]石杰，陶鹏丽，王瑞勇，杨鹏，孙冰冰，张倩.鲁米诺-高锰酸钾流动注射化学发光体系测定头孢呋辛钠[J].光谱实验室，2010（3）.
[3]王萍，胡晓，李文.RP-HPLC用于人血浆中头孢呋辛浓度的测定及其药代动力学的研究[J].江西医学院学报，2009（7）.
[4]刘晋平.注射用头孢呋辛钠[N].中国医药报，2009.
[5]刘川，赵颖颖，尹秋响，谢闯，王静康.头孢呋辛钠在水溶液中的降解动力学[J].化学工业与工程，2013，1.